4. Понятие «патогенность» и «вирулентность» микроорганизмов. Факторы патогенности микроорганизмов.

5) Способность синтезировать токсины.

5 Экзотоксины. Классификация, свойства, механизмы действия

6. Эндотоксины. Состав, свойства, механизм действия.

7. Понятие «иммунитет». Виды иммунитета. Иммунная система организма человека, структура.

8. Антигены гистосовместимости системы hla, их классификация.

10. Противовирусный иммунитет, его особенности и отличия от антибактериального иммунитета.

11. Неспецифические факторы защиты организма человека. Гуморальные факторы защиты (комплемент, лизоцим, бета-лизины, интерферон и др.).

12. Клеточные факторы защиты. Фагоцитоз, стадии, характеристика. Методы определения фагоцитарной активности, фагоцитарный показатель, индекс фагоцитоза.

13. Антигены, свойства. Процессинг антигенов макрофагами и в-лимфоцитами.

14. Антитела, их структура, свойства, функции. Нормальные показатели иммуноглобулинов сыворотки крови человека.

15.Моноклональные антитела. Гибридомы. Практическое использование.

16. Т- и в-лимфоциты, морфологическая и функциональная характеристика. Нормальные показатели периферической крови.

17. Макрофаги, их морфологическая и функциональная характеристика, роль в иммунном ответе.

18. Гиперчувствительность немедленного типа, природа, механизм проявления, методы диагностики.

19. Гиперчувствительность замедленного типа, природа, формы проявления, методы диагностики.

20. Иммунодефицитные состояния, классификация. Роль инфекции в развитии иммунодефицитов человека.

21. Оценки иммунного статуса организма человека (клинико-лабораторные методы).

22. Реакция агглютинации, непрямой гемагглютинации

23. Реакция преципитации. Её модификации.

24. Реакция связывания комплемента.

25. Реакция нейтрализации.

26. Иммуноферментный анализ.

27. Реакция торможения гемагглютинации.

28. Реакция фагоцитоза. Практическое использование реакции фагоцитоза при оценке иммунного статуса.

29. Молекулярно-генетические методы обнаружения возбудителей инфекции в организме (днк и рнк зондирование, полимеразная цепная реакция).

30. Биопрепараты для создания активного иммунитета. Вакцины, анатоксины. Принципы их получения.

31. Биопрепараты для создания пассивного иммунитета. Лечебные сыворотки и иммуноглобулины. Принципы их получения.

32. Диагностические биопрепараты. Диагностикумы для серологических реакций. Диагностические сыворотки. Принципы их получения.

9. Трансплантационный иммунитет. Методы типирования антигенов гистосовместимости при трансплантации тканей.

12. Клеточные факторы защиты. Фагоцитоз, стадии, характеристика. Методы определения фагоцитарной активности, фагоцитарный показатель, индекс фагоцитоза.

Для возникновения инфекции наряду со свойствами возбудителя важное значение имеет комплексом факторов и механизмов МК (чувствительность или резистентность к инфекции).

КОЖА И СЛИЗИСТЫЕ ОБОЛОЧКИ

механический барьер для большинства мк – препятствуюет проникновению внутрь организма. Постоянное слущивание верхних слоев эпителия, секреты желез способствуют удалению мк с поверхности.

бактерицидные свойства, обусловленные действием молочной и жирных кислот, различных ферментов, выделяемых железами кожи, лизоцимом слёзной жидкости, слюны и др секретов.

НОРМАЛЬНАЯ МИКРОФЛОРА

способствует созреванию иммунной системы,

играет роль в неспецифической защите заселенных ими участков ЖКТ, ДП и МПТ, т.к. обитающие в определенных биотопах мк препятствуют адгезии и колонизации слизистых патогенными мк (антагонисты патогенов).

Но некоторые представители N мкФ могут вызывать заболевания в случаях проникновения в большом количестве из одних биотопов в другие (при дисбактериозах и иммунодефицитах).

ГУМОРАЛЬНЫЕ ФАКТОРЫ: лизоцим, комплемент, интерфероны.

ФАГОЦИТИРУЮЩИЕ КЛЕТКИ (И. И. Мечников в 1883 г). Все фагоцитирующие , подразделяются на: микрофаги (ПМЯ: нейтрофилы, эозинофилы и базофилы) и макрофаги различных тканей орга­низма (соединительной ткани, печени, легких и др.). Макрофаги вместе с моноцитами крови и предшественниками (промоноциты и монобласты) объединены в систему мононуклеарных фагоцитов (СМФ). СМФ филогенетически более древняя по сравнению с иммунной.

Микро- и макрофаги имеют общее миелоидное происхож­дение (от ПСК). В перифери­ческой крови содержится больше гранулоцитов (зрелые клетки, 60–70 % всех лейкоцитов крови), чем моноцитов (1–6%). Моноциты, покидая кровяное русло, созревают в тканевые макрофа­ги. Особенно богаты ими печень, селезенка, легкие.

Мембрана всех фагоцитов отличается складчатостью и несет множество специфических рецепторов и антигенных маркеров, которые постоянно обновля­ются. Хорошо развит лизосомный аппара­т, лизосомы могут сливаться с мембранами фагосом или с на­ружной мембраной. В последнем случае происходит дегрануляция клеток и сопутствующая секреция лизосомных ферментов во внеклеточное пространство.

ФУНКЦИИ ФАГОЦИТОВ:

Защитная – очистка  от инфекционных агентов, продуктов распа­да тканей и т.д.

Представляющая – пре­зентация Аг эпитопов на мембране фагоцита

Сек­реторная – секреция лизосомных ферментов и других БАВ (монокинов), играющих важную роль в иммуногенезе.

СТАДИИ ФАГОЦИТОЗА:

Хемотаксис – целенаправленное передвижение фагоцитов в направлении химического градиента хемоаттрактантов (Б! компонен­ты, продукты деградации тканей, фракции С5а, С3а, лимфокины), связано с наличием специфических рецепторов.

Адгезия – опосредована рецепторами, но может происходить и неспецифическое физ-хим взаимодействие. Ад­гезия непосредственно предшествует эндоцитозу (захвату).

Эндоцитоз = фаго­цитоз (частицы >0,1 мкм) и пиноцитоз. Фагоцити­рующие клетки способны захватывать инертные частицы (уголь, латекс), обтеканием их псевдоподиями БЕЗ УЧАСТИЯ СПЕЦИФИЧЕСКИХ РЕЦЕПТОРОВ, в отличие от бактерий, Candida и др мк. Наиболее эффективен фагоцитоз, опосредованный Fc-рецепторами и рецепторами для С3 – ИММУННЫЙ. В результате эндоцитоза образуется фагосома.

Лишь некоторые бактерии (бескапсульные штаммы пневмо­кокка, штаммы стрептококка, лишенные гиалуроновой кислоты и М-протеина) фагоцитируются непосредственно. Большинство бак­терий фагоцитируются только после их опсонизации комплементом или (и) антителами.

Переваривание – происходит в фаголизосомах, мк поги­бают в результате действия кислородзависимых («окислительным взрывом»), и кислороднезависимых механизмов (катионные бел­ки и ферменты (в т.ч. лизоцим)).

Незавершенный фагоцитоз – многие вирулентные Б! часто не погибают и длительно персистируют внутри фаго­цитов, благодаря различным механизмам (нарушение слияния лизосом с фагосомами – токсоплазмы, tbc; устойчивость к лизосомным ферментам – гоно-, стафило-, стрептококки группы А и др; выход из фагосомы – риккетсии и др.).

ПРЕДСТАВЛЯЮЩАЯ ФУНКЦИЯ макрофагов состоит в фиксации на наружной мембране антигенных эпитопов мк. В таком виде они представлены для специфического распознавания Т-лимфоцитами.

СЕКРЕТОРНАЯ ФУНКЦИЯ заключается в секреции БАВ (монокины – вещества, регулирующие пролиферацию, дифференциацию и функции фагоцитов, лимфоцитов, фибробластов и других клеток). Особое место среди них занимает ИЛ-1 , к/й активирует многие функции Т-лимфоцитов, в т.ч. продукцию ИЛ-2. Также ИЛ-1 обладает свойствами эндогенного пирогена (действуя на ядра переднего гипоталамуса). Макрофаги продуцируют и секретируют простагландины, лейкотриены, циклические нуклеотиды , кислородные радикалы (0 2 , Н 2 0 2), компоненты комплемента, лизоцим и другие лизосомные ферменты, интерферон. За счет этих факторов фагоциты могут убивать бактерии не только в фаголизосомах, но и вне клеток, в ближайшем микроокру­жении.

МЕТОДЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ФАГОЦИТАРНОЙ АКТИВНОСТИ

Реакция фагоцитоза – в основе лежит опсонизация возбудителя.

Из крови выделяют фракцию фагоцитов, к ним добавляют гонококков и сыворотку обследуемого больного (Ат + С). Через определённое время мазки просматривают и подсчитывают не менее 100 фагоцитов. Из них определяют % , захвативших микробов. В N ФАГОЦИТАРНЫЙ ПОКАЗАТЕЛЬ=40-80%.

ФАГОЦИТАРНОЕ ЧИСЛО – подсчитывают число захваченных микробных клеток, суммируют и делят на кол-во фагоцитов, получают число микробных , поглощённых одним фагоцитом. В N ФЧ=1-5.

Лабораторная оценка нарушений врожденного иммунитета

Функциональная оценка В-лимфоцитов

Определение концентрации иммуноглобулинов в сыворотке крови и других биологических жидкостях является одним из наиболее важных интегральных показателей функциональной полноценности В-лимфоцитов и всей системы регуляции гуморального адаптивного иммунитета.

Традиционно концентрацию сывороточных иммуноглобулинов определяли методом радиальной иммунодиффузии в геле по Манчини . В настоящее время этот метод все еще находит свое применение, предпочтение отдается моноклональным антителам против отдельных антигенных детерминант (эпитопов), характерных для отдельных классов иммуноглобулинов.

Принцип метода Манчини заключается в том, что образцы исследуемых сывороток помещают в лунки агара, в которых содержатся антитела против IgM, IgG, IgA в стандартной концентрации. Иммуноглобулины, содержащиеся в исследуемой сыворотке, диффундируют в агар и при взаимодействии с соответствующими антителами образуют кольца преципитации. До тех пор, пока в лунке сохраняется избыток антигена, происходит постепенное увеличение диаметра кольца преципитации. Окончательный размер кольца преципитации зависит от концентрации соответствующих иммуноглобулинов. Метод Манчини позволяет определить концентрацию иммуноглобулинов, равную 10 мкг/мл. Ошибка метода составляет 10%.

Для диагностики нарушений врожденного иммунитета обычно определяют фагоцитарную и метаболическую активность нейтрофилов и оценивают состояние системы комплемента.

Наиболее информативными для оценки фагоцитарной системы следует считать фагоцитарный индекс, фагоцитарное число (отражает поглотительную способность нейтрофилов) и индекс бактерицидности (отражает переваривающую способность нейтрофила).

Фагоцитарный индекс (ФИ) – процент клеток, вступивших в фагоцитоз, от общего их числа.

Фагоцитарное число (ФЧ) – среднее число бактерий или частиц латекса, поглощенных в расчете на один нейтрофил.

Также проводятсятесты спонтанного и стимулированного фагоцитоза с использованием частиц латекса. Фагоцитоз с латексом основан на поглощении частиц латекса нейтрофилами (адгезия, захват и полное поглощение).

При проведении спонтанного теста лейкоциты, выделенные из периферической крови, смешивают с суспензией частиц латекса; при проведении теста индуцированного фагоцитоза к полученной смеси добавляют раствор пирогенала. После инкубирования при 37 0 С в течение 30 минут готовят мазки, а затем в фиксированных и окрашенных по Романовскому-Гимзе мазках подсчитывают процент нейтрофилов, поглотивших латекс.

Тест восстановления нитросинего тетразолия –НСТ-тест позволяет оценить метаболическую активность гранулоцитов крови, выявляет резервные возможности внутриклеточных систем фагоцитов. НСТ-тест основан на восстановлении поглощенного лейкоцитами крови растворимого красителя – нитросинего тетразолия в нерастворимый диформазан черного цвета (внутриядерные включения – глыбки диформазана) под влиянием супероксиданиона, образующегося в НАДФ-Н-оксидазной реакции, инициирующей процесс стимуляции фагоцитоза.

Постановка реакции . На обезжиренное предметное стекло наносят 0,02 мл 0,9% раствора хлорида натрия, 0,02 мл нейтрофильной взвеси и 0,02 мл 0,75% раствора НСТ (нитросинего тетразолия).

В качестве нагрузки используют коммерческий липополисахарид грамотрицательных бактерий E. coli или раствор пирогенала (липополисахарид S. typhi) в разведении 1:10. На другое обезжиренное стекло наносят 0,02 мл ЛПС, 0,02 мл нейтрофильной взвеси и 0,02 мл 0,75% раствора НСТ. Помещают во влажную камеру на 30 минут. Готовят мазки, высушивают, фиксируют. Окрашивают 0,1% раствором нейтрального красного. Учитывают нейтрофилы, высчитывая процент лейкоцитов с гранулами восстановленного НСТ (диформазан черного цвета).

Благодаря существующим ныне медицинским технологиям и силе человеческой мысли диагностика заболеваний достигла впечатляющих успехов. К примеру, определить состояние иммунной системы человека возможно измерением количества лейкоцитов в крови. Как известно, лейкоциты, называемые еще «белой кровью» от латинского leiko- белая, kytos- клетка, защищают человеческий организм от вредоносных интервентов. Их главная функция - создать своеобразную оборонную линию от болезнетворных вирусов и бактерий, токсических веществ, инородных тел и шлаков.

Своя задача есть у каждого . Одни из них активны в поиске посторонних элементов в организме. У других задача состоит в том, чтобы определить этот элемент на предмет «свой - чужой». Третий вид белых клеток настроен на передачу информации о работе лейкоцитов молодым клеткам, создавая так называемую «оборонную память». И последний аккорд в защите иммунной системы играют клетки, поглощающие вредоносные тела. Макрофаги полностью вбирают в себя интервента и растворяют его.

Метод исследования фагоцитарной активности лейкоцитов

Нейтрофилы в крови, хоть и называются белыми тельцами, на самом деле под микроскопом имеют розово-фиолетовый цвет. Природную естественную защиту организма запрограммированные клетки осуществляют при помощи множественных гранул, содержащих биологически активные элементы.

Разновидности лейкоцитов

В медицинской терминологии существует пять наименований «белых клеток» лейкоцитов (приведено их процентное содержание в норме):

• Нейтрофилы - ликвидируют болезнетворные бактерии, найденные в кровотоке - 55%;
• Лимфоциты - ответственны за память иммунной системы - 35%;
• Моноциты - вбирают в себя элементы посторонних агентов - 5%;
• Эозинофилы - борются с возбудителями аллергии - 2,5-3%;
• Базофилы - оказывают помощь в поиске чужеродных элементов другим лейкоцитам, от 0,5-1%.

Лейкоциты способны к фагоцитозу. Фагоцитируют макрофаги в зависимости от состояния крови и нервной напряженности. Как правило, при начальной стадии заболевания количество нейтрофилов в крови человека растет, они борются и справляются с инородными болезнетворными агентами. К хроническому их повышению приводит неправильное лечение антибиотиками.

Анализ и подсчет

Анализ требует предварительной подготовки: голодание несколько часов, абсолютная трезвость (употребление алкоголя и курение запрещено).

Определение фагоцитарной активности лейкоцитов проходит в несколько этапов:

• Берут массу с 1-2 млрд микробных тел в 1 мл жидкости.
• Перемешивают 2% раствор лимоннокислого натрия, кровь и микробную массу в соотношении 1:2:1. Помещают смесь в термостат при температуре 40,5 °С на 30 минут.
• Затем смесь центрифугируют на 1500 оборотов в минуту 10 минут, и уже на чашку Петри или на тестовое стекло снимают слои пипеткой.
• Фиксируют слои метиловым спиртом на протяжении 3-5 минут.
• После окрашивают по Романовскому-Гимзе на протяжении 10 минут.
• Высчитывают результат реакции. Под микроскопом подсчитывают 100 фагоцитарных клеток, поглотивших либо нет микробы, учитывая количество микробов в клетке и насыщенность их окраски (переваривание).
• На мазках через полчаса и два часа вычисляется количество фагоцитов, поглотивших микробы, к общему числу просмотренных клеток – фагоцитарный индекс (ФИ30 и ФИ120).

Общее число поглощенных микробов делят на количество клеток, участвующих в фагоцитозе и получают фагоцитарное число (ФЧ). Эта цифра показывает, сколько микробов находится внутри одного фагоцита в среднем. Показатель тоже оценивается через полчаса (ФЧ30) и два часа (ФЧ120).

Индекс бактерицидности фагоцитов находят, разделив количество уничтоженных микробов на количество поглощенных и умножив получившуюся цифру на сто.

С целью оценки качества работы фагоцитов внесено понятие индекса завершенности фагоцитоза. Он представляет собой среднее количество поглощенных микробов через полчаса, отнесенное к среднему количеству поглощенных микробов через 2 часа, и отношение фагоцитарных индексов.

Анализ полученных данных при исследовании, нормы и отклонения

ИЗФ здорового человека должен быть равен единице. Данный анализ и его интерпретация, требующая определенных знаний, отражает всю картину иммунного состояния организма.

Лейкоцитоз

Фагоцитарная активность лейкоцитов при проведении исследований повышалась у мышей при изменении обычных условий жизни. Такое явление иногда возникает и у людей. Лейкоцитоз имеет физиологическую причину и может отмечаться у каждого человека. К примеру, повышенная активность белых кровяных телец проявляется при тривиальных бытовых факторах: стресс, перемена погоды, непривычная физическая нагрузка.

У женщин происходит скачок количества лейкоцитов во время беременности, при менструациях. Следует принять во внимание, что в подобных случаях увеличение лейкоцитов незначительно и происходит в одинаковых пропорциях для всех групп клеток. Для волнения нет повода. Однако существуют состояния, когда количество лейкоцитов возрастает в 2-3 раза выше нормы. Подобного рода рост клеток означает оборонительную реакцию и относится к патологическим.

Клетки разных групп растут непропорционально по причине заболевания или воспалительного процесса. Нейтрофильный лейкоцитоз - это когда клетки одной группы значительно преобладают по количеству. Наблюдается такой рост при инфекциях бактериального происхождения, остром воспалении, отравлениях, обширной кровопотере, инфарктах и при стрессе или шоке.

Ослабление оборонных свойств иммунитета

У мышей, над которыми проводились опыты по исследованию макрофагов крови число нейтрофилов к старению значительно сокращается. Нарушение фагоцитарной активности нейтрофилов способствует снижению природного свойства организма бороться с заболеваниями и выводить шлаки и токсины. Примерно такая же практика снижения числа защитных клеток присутствует и в теле человека.

Естественным, физиологическим иммунодефицитом может сопровождаться старение. Также иммунитет снижает активность при радиоактивном облучении. Отчет Брауде говорит о том, что при однократном облучении мышей отмечается внезапное угнетение растворяющей способности макрофагов. Отсюда следует, что и у организма человека, облученного гамма- или альфа лучами, ослабевает иммунитет.

Занимательный факт: Когда у мышей возникает чувство тревоги и опасности, в крови неконтролируемо растет число лейкоцитов и их подвижность. Подобным образом организм животного приготавливается к гипотетической необходимости обороняться - купировать действие укусов, обеззараживать ранки. Этот алгоритм свойственен и человеку. В состоянии эмоционального напряжения содержание белых клеток в крови растет, формируя оборонительный барьер.

В реалиях сегодняшнего дня исследования крови на предмет иммунной защиты организма находят широкое применение.

Еще:

Разновидности лейкоцитов в крови, в чем их важность для человека?

Реакция фагоцитоза – в основе лежит опсонизация возбудителя.

Из крови выделяют фракцию фагоцитов, к ним добавляют гонококков и сыворотку обследуемого больного (Ат + С). Через определённое время мазки просматривают и подсчитывают не менее 100 фагоцитов. Из них определяют % ##, захвативших микробов. В N ФАГОЦИТАРНЫЙ ПОКАЗАТЕЛЬ=40-80%.

ФАГОЦИТАРНОЕ ЧИСЛО – подсчитывают число захваченных микробных клеток, суммируют и делят на кол-во фагоцитов, получают число микробных ##, поглощённых одним фагоцитом. В N ФЧ=1-5.

12. Органы и клетки иммунной системы.

ИММУННАЯ СИСТЕМА – обеспечивает специ­фическую защиту организма от генетически чужеродных молекул и клеток, в том числе от инфекционных агентов. Включает органы (центральные и периферические), ## и сосуды (переносят иммунокомпетентные ##).

К центральным органам отно­сятся костный мозг и тимус, в которых происходят пролиферация и дифференцировка иммунокомпетентных клеток: Т- и В-лимфоцитов (под влияние гормонов и микроокружения).

Периферические лимфоидные органы – скопления лимфоидной ткани под слизистыми оболочками ЖКТ, дыхательного и мочеполового трактов (групповые лимфатические фолликулы, миндалины и др.), лимфатические узлы и селезенка. В них происходят пролиферация и диф­ференцировка лимфоцитов под влиянием Аг, поступившего в организм.

Клетки иммунной системы:

1) Т-тимфоциты (тимусзависимые) – созревают в тимусе, отвечают за клеточный и частично за гуморальный иммунитет.

2) В-лимфоциты (bursa-зависимые) – отвечают за гуморальный иммунитет, за выработку Ig.

3) Тканевой макрофаг – захватывает и перерабатывает Аг, затем передаёт информацию о нём на лимфоциты.

4) Естественные киллеры – контактируют с чужеродными ## (Б!!, опухолевые, заражённые В!!) и убивают их (лизируют)

5) Большие гранулярные лимфоциты.

6) Дендритные ## – отвечают за связывание и хранение Аг информации.

7) Вспомогательные клетки: нейтрофилы, тучные ##, базофилы, эозинофилы, тромбоциты, эритроциты.

13. Т-клетки.

Т-ЛИМФОЦИТЫ в процессе дифференцировки и пролиферации образуют 4 субпопуляции, отличающиеся по своим функциям.

Т-хелперы, или помощники (to help), и Т-супрессоры, или ингибиторы (to suppress) выполняют регуляторные функции. Т-хелперы узнают детерминантные группы АГ на мембране макрофага и активируют при помощи медиаторов В-лимфоциты и Т-лимфоциты-эффекторы. Т-супрессоры угнетают Т-хелперы, В-лимфоциты или плазмати­ческие клетки Þ задерживают синтез антител.

К Т-лимфоцитам-эффекторам относятся цитотоксические клетки Т-киллеры (to kill) и Т-эффекторы, продуцирующие лимфокины . Основная функция цитотоксических Т-киллеров – уничтожать клетки-«мишени», несущие соответствующий чужеродный АГ. Т-эффекторы обеспечивают клеточный специфический иммунитет, участвуют в формировании реакции ГЗТ.

РЕЦЕПТОРЫ В- и Т-лимфоцитов (как и АТ) являются антигенраспознающими молекулами иммунной системы. Они способны узнавать только одну определенную моле­кулярную структуру детерминантной группы АГ (эпитопа).

Рецепторы В-лимфоцитов представляют собой антигенсвязывающие участки молекул Ig, кото­рые синтезируются данным В-лимфоцитом и частично остаются в составе его мембраны. Они фиксируются при помощи так назы­ваемого «якорного» сегмента иммуноглобулина (Fc-конец).

Рецепторы Т-лимфоцитов структурно похожи на Ig – это белки, состоящие из двух субъединиц – α- и β-, расположенных на поверхности Т-лимфоцита. Антигенсвязывающий участок в молекуле рецептора Т-лимфоцита образован гипервариабельными участками полипептидных цепей, напоминающими аналогичные участки Ig, между которыми образуется полость.

Как уже отмечалось, рецепторы В- и Т-лимфоцитов узнают антигены одним и тем же спо­собом, но узнавание происходит в разных условиях. В-лимфоциты спо­собны узнавать и реагировать на СВОБОДНЫЙ АГ, цирку­лирующий в кровяном русле, в то время как Т-лимфоциты узнают и активируются только тем АГ, детерминантные группы которого представлены НА МЕМБРАНЕ МАКРОФАГОВ. В обоих случаях при взаимодействии с антиге­нами участвуют белки главного комплекса гистосовместимости HLA, являющиеся маркерами индивидуальности каждого ор­ганизма. Например, Т-хелперы распознают АГ только в том случае, если он связан с белками МНС II на поверхности макрофагов. Т-киллеры взаимодействуют с чужеродными АГ, находящимися на поверхности клеток-«мишеней» в окружении антигенов МНС I. Тканевые антигены МНС I, введенные в организм реципиента при пересадках каких-либо органов донора (почки, сердце и др.), становятся «мишенями» для Т-киллеров. В этом случае Т-киллеры напрямую «атакуют» чужеродную ткань, в ре­зультате чего происходит отторжение трансплантата. Вместе с этим Т-киллеры защищают организм от вирусной инфекции, т.к. при размножении вируса в клетке его АГ могут встраи­ваться в # мембрану. Приобретение клеткой вирусных антигенов наряду с имеющимися у нее маркерами – белками МНС I, делает ее «мишенью» для Т-килле­ров, которые уничтожают зараженную вирусом клетку.

14. В- клетки.

В-ЛИМФОЦИТЫ. Основной их функцией является синтез Ig, который начинается после созре­вания в плазматические ##. СТИМУЛОМ для пролифе­рации является связывание эпитопов АГ с гомологичными рецепторами на мембране. В результате образуется иммунологически одно­родный клон клеток, снабженных идентичными Ig рецепторами. Затем под влиянием медиа­торов происходит дифференцировка с образованием клеток иммунологической памяти и клеток, продуцирующих АТ.

4.4.6 Определение фагоцитарной активности клеток крови

Принцип метода. Метод основан на явлении фагоцитоза – реакции организма, проявляющейся в способности клеток-фагоцитов захватывать и переваривать чужеродные микроорганизмы.

Реактивы: 1. Стабилизатор крови.

2. Взвесь суточной микробной культуры (0,5-1 млрд.м.к./мл) в физрастворе.

Ход определения. В стерильные центрифужные пробирки наливают по 0,5 мл стабилизированной исследуемой крови и 0,5 мл микробной взвеси, содержащей по оптическому стандарту мутности 0,5-1 млрд. микробных клеток в 1 мл.

В зависимости от задач и целей исследований в работе могут быть ис-пользованы различные виды живых или убитых микроорганизмов: ки-шечная палочка, стафилококк, стрептококк и т.п.

Пробирку с приготовленной смесью осторожно встряхивают, поме-щают на 30 мин в термостат или водяную баню, отрегулированную на 37°С. По истечении указанного срока из смеси делают 3-5 мазков (по спо-собу приготовления мазков крови), фиксируют метиловым спиртом и окрашивают по Романовскому-Гимзе.

Расчет: Фагоцитарная активность лейкоцитов. Фагоцитарная ак-тивность выражается процентом активных лейкоцитов (фагоцитов) в об-щем числе подсчитанных нейтрофильных лейкоцитов. Из числа подсчи-танных 100 нейтрофилов выводится их процентное соотношение, т. е. лей-кограмма. По найденным 100 фагоцитам определяют число клеток, участ-вующих в фагоцитозе (захвативших определенное количество микробов). Полученный результат выражают в процентах.

Фагоцитарный индекс определяется средним числом фагоцитиро-ванных микробов, приходящихся на один активный лейкоцит. Этот пока-затель характеризует интенсивность фагоцитоза. Для определения фагоци-тарного индекса используют те же мазки крови, по которым определялась фагоцитарная активность лейкоцитов. В препаратах, приготовленных опи-санным выше способом, подсчитывают не менее 100 лейкоцитов и количе-ство поглощенных ими микробных тел. Вычисляется фагоцитарный индекс путем деления числа фагоцитированных бактерий на число активных лей-коцитов.

Фагоцитарное число является дополнительным показателем, харак-теризующим как агрессивность нейтрофилов, так и их активность. Вычис-ляется фагоцитарное число путем деления числа фагоцитированных бакте-рий на общее число подсчитанных лейкоцитов.

Фагоцитарная емкость определяется количеством микробных кле-ток, фагоцитированных лейкоцитами в 1 мм3 крови. Этот показатель ха-рактеризует общую фагоцитарную активность крови и зависит от количе-ства лейкоцитов, содержащихся в I мм3. Некоторые авторы этот показатель называют фагоцитарной интенсивностью, абсолютным фагоцитозом или общим фагоцитозом. Вычисляется фагоцитарная емкость умножением фа-гоцитарного числа на количество лейкоцитов в 1 мм3 крови.

При высокой функциональной активности фагоцитов процесс перева-ривания захваченных микробов начинается немедленно, и уже в первые 30 мин. отмечают не только визуальное изменение микробной клетки, но и преобразование некоторых нейтрофильных лейкоцитов (набухание, изме-нение очертания ядра, слабое прокрашивание и т.д.), т.е. появляются при-знаки, характеризующие автолиз (самораспад) и начало деструкции нейтрофила. В течение 2 ч фагоцитарная реакция в норме заканчивается перевариванием захваченных микробов и разрушением полиморфноядер-ных фагоцитов.

Для количественной оценки переваривающей способности фагоцитов введено понятие индекса завершенности фагоцитоза (ИЗФ), для этого определяют полусумму отношений фагоцитарной активности нейтрофи-лов, полученной через 30 мин. инкубации к фагоцитарной активности нейтрофилов, полученной через 2 ч, и отношения фагоцитарных индексов в эти же сроки. Принято считать, что при ИЗФ 1 и больше реакция счита-ется завершенной, а меньше 1 – незавершенной.