Лабораторный метод применяемый при обследовании на гельминтозы. Методы лабораторной диагностики гельминтов

Эффективным и удобным методом гельминтологического исследования является изучение толстого мазка по Като , сущность которого состоит в обнаружении яиц гельминтов в толстом мазке фекалий, просветленных глицерином и подкрашенных малахитовой зеленью. Состав смеси Като - 6 мл 3% водного раствора малахитовой зелени, 500 мл глицерина, 500 мл 6% раствора фенола. Раствор стабилен, может храниться при комнатной температуре. Для приготовления препаратов кусочки фекалий величиной с горошину наносят на предметное стекло, покрывают пленкой гидрофильного целлофана, выдержанного в смеси Като в течение 24 ч, и придавливают его к стеклу для равномерного распределения материала. Просветленные в течение 40-60 мин мазки микроскопируют. Подсчитывают обнаруженные яйца гельминтов и по морфологическим признакам определяют их видовую принадлежность. Метод позволяет выявить яйца аскарид, власоглава, цестод, трематод, в меньшей степени - анкилостомид и карликового цепня.

Широко применяются также методы обогащения . Принцип флотационных методов состоит в суспендировании фекалий в солевом растворе, имеющем большую относительную плотность по сравнению с яйцами гельминтов, вследствие чего они всплывают на поверхность. Под микроскопом исследуется содержимое поверхностной пленки. В качестве обогатительных смесей используют растворы: поваренную соль - 400 г в 1 л воды (относительная плотность по Фюллеборну -1,18); азотнокислый натрий - 1 кг в 1 л воды (относительная плотность по "Калантарян-1,38); азотнокислый натрий - 900 г и азотнокислый калий - 400 г в 1 л воды (относительная плотность по Брудастову и Красноносу-1,48). Приготовленные растворы кипятят и охлаждают.
Для исследования вносят 5-10 г фекалий в стеклянный или фаянсовый стакан, добавляют в него 100-200 мл солевого раствора и тщательно размешивают. Затем удаляют всплывшие крупные частицы деревянным шпателем или совочком из бумаги либо картона и тотчас же прикладывают к поверхностной пленке широкое предметное стекло так, чтобы солевой раствор и предметное стекло полностью соприкасались. После 30-40-минутного отстаивания смеси предметное стекло снимают, кладут под микроскоп пленкой кверху и тщательно просматривают всю поверхность. Во избежание высыхания можно добавить 2-3 капли 50% раствора глицерина. Поверхностную пленку можно снимать также проволочной петлей. Эффективность флотационных методов повышается по мере увеличения относительной плотности солевых растворов. С помощью этих методов можно выявлять яйца нематод, цестод и трематод.

Для обнаружения яиц в фекалиях применяют метод седиментации по Красильникову . Фекалии смешивают с 1 % раствором детергента (стиральный порошок «Лотос» и др.) в соотношении 1:10 до образования суспензии. Под влиянием детергента растворяются различные компоненты фекалий (белки, жиры, тканевые элементы). Через 30 мин содержимое пробирки встряхивают в течение 1-2 мин, после чего центрифугируют 5 мин. Из осадка готовят препараты и просматривают под микроскопом.
В полевых условиях, а также при массовых обследованиях населения на пораженность гельминтами удобно применять метод толстого мазка по Като. В стационарных условиях при обследовании больных предпочтительнее использовать наиболее эффективные флотационные методы. При использовании этих методов в ходе микроскопии целесообразно подсчитывать обнаруженные в препарате яйца. При соблюдении стандартности навески или объема, взятых для исследования фекалий (например, 1 чайная или столовая ложка), и постоянного единого объема солевых растворов можно ориентировочно судить об интенсивности инвазий. Этот количественный учет может быть полезным при обосновании назначенного лечения и оценке эффективности проведенной дегельминтизации. Кроме того, для установления интенсивности инфекции могут быть использованы и другие более точные количественные методы, в частности метод Столла.

Для диагностики тениаринхоза и энтеробиоза применяют метод исследования перианально-ректальных соскобов. Деревянным шпателем, смоченным в 50% растворе глицерина, делают соскоб с перианальных складок утром до дефекации в окружности заднего прохода и нижних отделов прямой кишки. Полученный материал, очищенный со шпателя краем покровного стекла, помещают на предметное стекло в каплю 50% раствора глицерина, накрывают покровным стеклом и исследуют под микроскопом. Можно исследовать также полоску целлюлозной ленты, которую вначале прижимают клейкой стороной к пернанальным складкам, затем помещают на предметное стекло и микроскопируют.

Обнаружение личинок нематод в фекалиях по методу Бермана . Метод основан на термотропном свойстве личинок. Для исследования берут 1 столовую ложку фекалий, помещают их в металлическую сетку или сетку из нескольких слоев марли на проволочном каркасе. Сетку устанавливают в воронку, укрепленную в штативе. К воронке присоединяется резиновая трубка с зажимом. Приподняв сетку, воронку заполняют водой (температура +40°...+50°С) так, чтобы нижняя часть сетки была погружена в воду. Личинки из фекалий активно мигрируют в теплую воду и, оседая, скапливаются в нижней части воронки. Через 2-4 ч зажим открывают, воду спускают в центрифужную пробирку и центрифугируют в течение 2-3 мин. Затем сливают надосадочную жидкость, осадок переносят на предметное стекло и просматривают под микроскопом, где отыскивают подвижные личинки возбудителя стронгилоидоза.

Метод Харада и Мори позволяет дифференцировать личинки анкилостом и некаторов. Личинки анкилостомид культивируют на фильтровальной бумаге. С этой целью 0,5 г свежих фекалий, взятых у больного не позже чем через 1 ч после дефекации, наносят на полоски фильтровальной бумаги, размером 12X1,5 см, оставляя оба конца полоски чистыми. Один конец полоски погружают в пробирку, четвертая часть которой заполнена водой, а другой - зажимают пробкой. Пробирки ставят в термостат при температуре +26... + 28°С. Развившиеся из яиц личинки опускаются по фильтровальной бумаге и оседают на дно пробирки. Спустя 5-6 дней полоску бумаги удаляют, а оставшуюся в пробирке жидкость исследуют под лупой либо центрифугируют. Образовавшийся при центрифугировании осадок исследуют под световым микроскопом. При использовании вместо пробирок четырехгранных стеклянных банок (размером 15ХЮХ7 см), к стенкам которых прикрепляют по 4 бумажные полоски, эффективность анализов повышается (Г. М. Ма- руашвили с соавт., 1966).

Методы исследования на шистосомозы . Исследование фекалий - порцию фекалий смешивают с 250 мл воды, процеживают через 3 слоя марли в конический сосуд, который доверху наполняют водой. Через 30 мин слой жидкости сливают, к осадку приливают свежую порцию воды. Осадок промывают до получения прозрачной надосадочной жидкости и микроскопируют.

Метод лярвоскопии - в колбу Эрленмейера с напаянной сбоку стеклянной трубочкой, направленной вверх, помещают 20-25 г фекалий и промывают водопроводной водой. Затем колбу накрывают темной бумагой, оставив на свету напаянную стеклянную трубочку при температуре +25...+30°С. Вылупившиеся мирацидии концентрируются у мениска в боковой трубочке, где их можно видеть с помощью лупы или невооруженным глазом. Исследование мочи -100 мл мочи, собранной в период между 10 ч утра и 14 ч дня, или суточную порцию отстаивают, а затем центрифугируют при 1500 об/мин. Полученный осадок наносят* на предметное стекло и микроскопируют. ВОЗ рекомендует метод фильтрования всей порции мочи. После фильтрования фильтры обрабатывают формалином или подогревают (чтобы убить яйца), а затем увлажняют водным раствором нингидрина. В подсушенных препаратах зародыши яиц приобретают фиолетовую окраску.

Применение иммунологических методов исследования для диагностики шистосомозов связано с трудностями, так как взрослые шистосомы и их яйца содержат большое количество антигенов, вызывающих иммунные реакции, которые не являются видоспецифическими (Д. Бредли, 1979).

В нашей стране для постановки иммунологических реакций при гельминтозах выпускается целый ряд стандартных диагностикумов. Практическое применение имеют аллергическая кожная проба на эхинококкоз и альвеококкоз, РЛА с эхинококковым антигеном, РСК на холоде, реакция преципитации на холоде в различных модификациях (кольцевая преципитация, преципитация в пробирках или капиллярах, которые ставятся с трихинеллезным, цистицеркозным и мигроаскаридозным антигенами). Стандартные диагностикумы для постановки вышеназванных серологических реакций изготавливаются предприятиями по производству бактерийных препаратов. К выпускаемым диагностикумам предприятие-изготовитель прилагает подробные инструкции о правилах хранения, сроках годности препарата и наставления по применению соответствующих антигенов с техникой постановки реакции.

В последние годы перечень серологических реакций, применяемых для диагностики гельминтозов, значительно расширился. В этих целях используются следующие реакции: РИГА, непрямой иммунофлюоресценции (РИФ), иммунодиффузии в геле (РИД), встречного иммуноэлектрофореза (ВИЭФ), РЭМА. Эти реакции могут использоваться при аскаридозе, токсокарозе, трихинеллёзе, анкилостомидозах, филяриатозах, эхинококкозе и альвеококкозе, опистор- хозе, шистосомозе, парагонимозе. Однако для этих реакции в нашей стране,не выпускаются стандартные диагностикумы и не регламентирована техника их постановки. Отдельные лаборатории, в основном научные, готовят самостоятельно специфические антигены и применяют их в различных модификациях. Описание этих методов широко представлено в литературе и не является строго унифицированным. Интерпретация данных иммунологического анализа должна основываться на изучении динамики иммунного ответа с учетом уровня специфичности и чувствительности каждой применяемой серологической реакции. Поэтому при постановке диагноза, а также при сероэпидемиологических обследованиях населения целесообразно пользоваться несколькими наиболее чувствительными реакциями. С этих позиций хорошо зарекомендовали себя реакции ВИЭФ и РЭМА, которые отличаются высокой чувствительностью и достаточно высокой специфичностью (П. Амбруаз-Тома, 1978; И. Е. Баллад, 1979; Г. М. Негряну, 1980; А. М. Пономарева, 1981; А. Я. Лысенко, 1978, и др.). Эффективность РЭМА проверена при амебиазе, лейшманиозе, трипаносомозе и токсоплазмозе (Г. А. Ермолин, 1980).

Методы гельминтологических исследований делятся на прямые и косвенные. Прямые методы: выявление самих гельминтов, их фрагментов, яиц, личинок в фекалиях, моче, дуоденальном секрете, мокроте, носовой и влагалищной слизи, содержимом подногтевых пространств, биопсированных кусочках ткани. Косвенные методы: выявление вторичных изменений, возникающих в организме человека в результате жизнедеятельности паразита, серологическими реакциями, общим исследованием крови, мочи. Наиболее распространенными методами исследования фекалий являются гельминтоовоскопические и протозооскопические. При диагностике нельзя каким-либо одним методом выявить яйца или личинки всех видов гельминтов, обитающих в пищеварительной системе человека. Так, при использовании метода флотации в поверхностную пленку не всплывают (из-за высокого удельного веса) яйца трематод, в некоторых случаях неоплодотворенные яйца аскарид. В кале очень редко можно обнаружить яйца остриц, онкосферы тениид, которые выявляются специальными методами исследований: соскоб с перианальных складок для остриц и тениид, методы осаждения для трематод (яйца описторха и др.). Поэтому для целенаправленного обследования больного на гельминтозы врач в направлении должен указать, на какие гельминты следует обратить основное внимание (диагноз), что позволит лаборанту выбрать соответствующую методику для выявления данного вида гельминта. Фекалии, взятые из разных мест испражнений в количестве не менее 50 граммов (чайная ложка) в чистую стеклянную посуду, должны быть отправлены в лабораторию не позднее чем через сутки после дефекации и исследованы в день поступления. В случае необходимости сохранения кала до следующего дня его помещают в холодное место (0-4°С) или заливают одним из консервантов. Перед исследованием кал перемешивают палочкой, чтобы яйца гельминтов оказались равномерно распределенными в общей массе. При обнаружении в препарате яиц какого-либо гельминта просмотр не прекращают, т.к. может быть двойная или тройная инвазия. Контроль за эффективностью лечения гельминтозов осуществляется путем исследования фекалий на яйца гельминтов через 2-3 недели или через 2-3 месяца после лечения в зависимости от обнаруженного гельминта. Макроскопические методы служат для обнаружения в кале целых половозрелых гельминтов или их фрагментов невооруженным глазом или с помощью ручной лупы. Часто на поверхности кала после дефекации можно видеть активно ползающих остриц; выделяются с калом аскариды; иногда люди сами замечают отхождение гельминтов. У больных дифиллоботриозом могут выделяться обрывки стробилы лентеца (в виде "лапши"), а у инвазированных тениидами (свиной или бычий цепень) с калом часто отходят членики гельминтов (в виде "белых обсечек") или они активно выползают из анального отверстия. Макроскопический метод является основным для дифференциальной диагностики тениидоза и тениаринхоза (в сочетании с опросом). Из специальных макроскопических методов применяется метод последовательного промывания фекалий. Фекалии размешиваются в воде для получения равномерной суспензии, после чего при хорошем освещении их тщательно просматривают отдельными небольшими порциями в черных фотографических кюветах или на темном фоне в чашках Петри. Пинцетом или препаровальной иглой извлекают все подозрительные белые частицы, крупные образования, подозрительные на фрагменты гельминтов, и рассматривают их под лупой между двумя предметными стеклами. Мелких гельминтов или головки цестод рассматривают под лупой в капле глицерина или под микроскопом. При использовании этого метода для диагностики члеников свиного, бычьего цепней, широкого лентеца отмытые членики помещают между двумя стеклами и, просматривая на свет под лупой или малым увеличением микроскопа, определяют видовую принадлежность по строению матки (у зрелого членика свиного цепня от центрального ствола отходят 8-12 боковых ответвлений, а у бычьего цепня 18-32, чаще 28-32, у широкого лентеца членики больше в ширину и матка в центре в виде "розетки"). Если матку плохо видно, то ее предварительно можно подержать некоторое время в 50% растворе глицерина, после чего даже запустевшие стволы матки просматриваются хорошо. При определении этих цестод по строению отошедших головок их с шейкой осторожно кладут в каплю глицерина между предметными стеклами (или покрывают покровным стеклом) и, не передавливая, рассматривают под микроскопом при малом увеличении.

Микроскопические методы подразделяются на простые, сложные и специальные.

К простым относятся методы нативного мазка, нативный мазок раствором Люголя, методы толстого мазка под целлофаном по Като, закручивания (по Шульману) и перианального соскоба.

Сложные методы являются более эффективными и основаны на концентрации яиц в препаратах. Они включают в себя предварительную обработку фекалий жидкими реактивами, в результате чего яйца гельминтов или выпадают в осадок, или всплывают на поверхность жидкости.

К сложным методам относятся методы обогащения:

а) флотационные (когда удельный вес яиц меньше удельного веса солевого раствора и яйца всплывают в поверхностную пленку);

б) седиментационные (когда удльный вес яиц больше удельного веса солевых растворов и яйца оседают в осадок).

Специальными методами обнаружения яиц и личинок гельминтов, цист и вегетативных форм простейших являются методы соскоба, флотации, седиментации, ларвоскопии, протозооскопии, исследование желчи и методы окраски мазков кала, мокроты и др.

Введение

Глава I. Классификация гельминтозов

Глава II. Патогенез гельминтозов

1 Основные фазы гельминтозов в патогенезе и клинике

2 Фактор воздействия возбудителя на иммунную систему хозяина

Глава III. Основные принципы диагностики гельминтозов

Глава IV. Макроскопические методы исследования

Глава V. Качественные методы исследования

1 Нативный мазок

2 Метод Като

3 Методы, основанные на принципе осаждения яиц

4 Методы обогащения, основанные на принципе всплывания яиц

5 Методика обнаружения яиц гельминтов в кале методом обогащения

6 Флотационные методы

7 Метод липкой ленты

Глава VI. Количественные методы исследования

1 Метод Столла

2 Метод Красильникова-Волковой

ГлаваЛАВА VII. Методы диагностики протозойных инвазий

1 Нативный мазок

Заключение

Список литературы

ВВЕДЕНИЕ

Развитие малого бизнеса в пищевой промышленности при недостаточном технологическом контроле привел к снижению качества и безопасности пищевой продукции. Появились незаконные точки убоя скота, подпольные производства мясопродуктов, не прошедших ветеринарный контроль. Ухудшению ситуации также способствует выдача сертификатов ветеринарного контроля на пищевую продукцию «на коммерческой основе», снижение качества профосмотров, прием на работу лиц без санитарных книжек.

Ежегодно в мире регистрируется рост численности домашних животных. По данным Российской Кинологической Федерации, около 5млн. породистых собак зарегистрировано в России. В целом, предположительно, в нашей стране около 30 млн. собак, к тому же многие из них безнадзорны. По данным различных исследований до 80% домашних собак заражены глистами. Проблема загрязнения окружающей среды фекалиями этих животных становится все более острой. Обследованиями, проведенными в различных странах, установлена значительная обсемененность почвы в населенных пунктах яйцами гельминтов с колебаниями до 60% положительных проб. Наиболее обсеменены яйцами гельминтов места около мусорных контейнеров, дворики, песочницы детских садов, рынки, ветлечебницы города, подвалы домов.

На сегодняшний день вследствие сложившейся проблемы большое значение имеет диагностика гельминтозов, что особенно важно на ранних этапах заболевания.

Целью нашей работы является теоретическое изучение методов современной диагностики самых распространенных гельминтозов, использующихся на сегодняшний день в клинической практике.

Задачи работы:

выявление наиболее эффективных методов исследования гельминтозов в клинической практике;

Знакомство со статистикой ВОЗ;

определение преимуществ и недостатков разнообразных методов;

выявление наиболее результативного методов;

изучение истории развития гельминтозов

изучение применяющихся и перспективных методов выявления гельминтозов.

ГЛАВА I. КЛАССИФИКАЦИЯ ГЕЛЬМИНТОЗОВ

Во вторую группу входят гельминты (трихинеллы, трематоды), заражение которыми может произойти через мясо животных и рыбу.

Гельминты при питании выделяют в организме хозяина ядовитые вещества, которые мгновенно всасываются в кровь, разносятся по тканям хозяина, воздействуя на его нервную систему и все жизненно важные органы. .

Гельминтозы характеризуются развитием яиц и личинок возбудителей только во внешней среде без участия промежуточных хозяев. Развитие яиц геогельминтов происходит в почве или на овощах и определяется такими факторами, как температура, влажность и аэрация почвы.

Тениидозы - заболевания, связанные с употреблением мясного сырья. При данных заболеваниях человек является окончательным хозяином гельминтов и единственным источником инвазии. Человек заражается при употреблении в пищу мяса, инфицированного личиночной стадией биогельминта. Известны две разновидности цепня: бычий цепень и свиной. При употреблении мяса, зараженного личинками бычьего цепня, у человека развивается заболевание, называемое тениаринхозом. При употреблении мяса, зараженного личинками свиного цепня, развивается тениоз.

Трихинеллез - биогельминтоз, характеризующийся лихорадкой, мышечными болями и аллергическими проявлениями. Заражение человека происходит при употреблении мяса, содержащего инкапсулированные личинки трихинелл.

Дифиллоботриоз - биогельминтоз, характеризующийся поражением желудочно-кишечного тракта и имеющий хроническое течение. Заражение человека происходит при употреблении в пищу недостаточно термически обработанной или малосоленой рыбы и икры, содержащей личинки лентеца.

Описторхоз - биогельминтоз, характеризующийся поражением печени, поджелудочной железы и имеющий хроническое течение. Заражение человека происходит при употреблении малосоленой, слабо провяленной, сырой или недостаточно термически обработанной рыбы, содержащей личинки кошачьей двуустки.

Геогельминтозы - это гельминтозы, возбудители которых проходят развитие без участия промежуточного хозяина. Выделившиеся из организма яйца или личинки геогельминтов развиваются до инвазионной стадии в почве. Представители живой природы (биотическая среда) здесь могут играть только роль механических переносчиков инвазионных личинок. Например, мухи случайно могут переносить яйца или личинок на хоботке или ножке. К геогельминтозам относятся: аскаридоз, трихоцефалез, анкилостомидозы, стронгилоидоз и другие заболевания. ах, собаки - на конечностях, волосах.

ГЛАВА II. ПАТОГЕНЕЗ ГЕЛЬМИНТОЗОВ

По мнению экспертов ВОЗ, гельминтозы в настоящее время в какой-то мере стали «забытыми болезнями» - во всем мире наблюдается недооценка их медико-социальной значимости. Даже в эндемичных странах им уделяется недостаточное внимание, как со стороны органов здравоохранения, так и населения.

2.1 Основные фазы гельминтозов в патогенезе и клинике

В патогенезе и клинике гельминтозов выделяют две основные фазы: острую - первые 2-3 нед после инвазии, а при тяжелом течении - до 2 мес и более, и хроническую - длительностью от нескольких месяцев до многих лет.

.2 Фактор воздействия возбудителя на иммунную систему хозяина

Фактор воздействия возбудителя на иммунную систему «хозяина» продолжает играть значительную роль и в хронической фазе инвазии. Одной из важных причин органных и системных поражений, особенно при тканевых гельминтозах, является образование иммунных комплексов, которые активизируют медиаторные системы (комплемента, цитокинов и др.). Наряду со стимуляцией иммунного ответа гельминты оказывают иммуносупрессивное действие, что способствует их выживанию в организме хозяина. Состояние иммунодефицита при гельминтозах отрицательно влияет на резистентность человека к бактериальным, вирусным и другим инфекциям, способствует их затяжному течению и формированию носительства, снижает эффективность профилактических прививок. Это хорошо показано на частоте брюшнотифозного носительства, заболеваемости туберкулезом и другими хроническими инфекционными болезнями среди населения гиперэндемичных очагов описторхоза.

При клинически манифестных формах гельминтозов первые признаки появляются в разные сроки после заражения: при аскаридозе проявления острой фазы наблюдаются уже на 2-3-й день, при большинстве других гельминтозов - через 2-3 нед, при филяриозах инкубационный период длится 6-18 мес. В ранней острой фазе гельминтозов характерны проявления аллергических реакций: лихорадка, рецидивирующие зудящие высыпания на коже, отеки - от локальных до генерализованных, увеличение лимфатических узлов, миалгия, артралгия, в периферической крови - лейкоцитоз с гиперэозинофилией. На этом фоне нередко развиваются легочный синдром (от незначительных катаральных явлений до астмоидных состояний, пневмонии и плеврита) и абдоминальный синдром (боли в животе и диспептические расстройства). Увеличиваются в размерах печень и селезенка, возможны разной степени выраженности симптомы и синдромы поражения центральной нервной системы (ЦНС). При некоторых гельминтозах наблюдаются также специфические признаки: при трихинеллезе в типичных случаях с первых дней болезни наблюдается симптомокомплекс, включающий лихорадку, боли в мышцах, отек век и лица; при трематодозах печени (описторхоз, фасциолез) - желтушный синдром, увеличение печени и селезенки. Даже среди гельминтозов, вызванных близкими видами возбудителей, отмечаются существенные различия в тяжести течения и характере проявлений острого периода: так, при японском шистосомозе он развивается намного чаще и протекает тяжелее, чем при мочеполовом и кишечном шистосомозах.

Большим полиморфизмом клинических проявлений характеризуется стронгилоидоз, при котором наряду с разнообразными аллергическим и диспептическим симптомами у больных нередко наблюдаются признаки нарушения функции желчевыводящих путей. При трематодозах печени (описторхоз, клонорхоз, фасциолез) развиваются хронический холецистохолангит, гепатит, панкреатит, возможны поражения различных отделов желудочно-кишечного тракта, наблюдаются также неврологические нарушения. Характерным признаком мочеполового шистосомоза является «терминальная гематурия» (появление капельки крови в конце мочеиспускания) и дизурические расстройства. У больных филяриозами в той или иной степени выражен аллергический синдром, для лимфатических филяриозов (вухерериоз и бругиоз) характерны лимфоаденопатия, лимфангит и лимфостаз, при онхоцеркозе наряду с этими симптомами отмечаются серьезные поражения глаз.

Кишечные цестодозы (дифиллоботриоз, тениаринхоз, тениоз, гименолепидоз) во многих случаях протекают бессимптомно, проявляясь только отхождением зрелых члеников гельминта при дефекации или самостоятельно (только при тениаринхозе). У больных дифиллоботриозом развивается анемия, обусловленная дефицитом витамина В12. Среди гельминтозов особое место занимают ларвальные цестодозы: эхинококкоз, альвеококкоз, цистицеркоз. Они также могут длительное время протекать бессимптомно даже при наличии кист довольно крупных размеров. В то же время разрыв или нагноение даже небольшого эхинококкового пузыря ведет к тяжелым последствиям: развитию анафилактического шока, гнойного перитонита, плеврита и т. п. В результате сдавливания растущим пузырем или альвеококком портальной и нижней полой вены развивается портальная гипертензия со всеми характерными проявлениями и последствиями.

Цистицеркоз ЦНС протекает в виде церебрального, спинального поражений с соответствующей разнообразной симптоматикой; локализация гельминта в желудочках мозга сопровождается признаками внутричерепной гипертензии. Токсокароз, регистрируемый в нашей стране преимущественно у детей, клинически выражается абдоминальным, легочным синдромами, неврологическими нарушениями, поражением глаз, выраженной эозинофилией в периферической крови. .

В последние годы в изучении механизмов развития патологического процесса при гельминтозах достигнуты большие успехи.

ГЛАВА III. ОСНОВНЫЕ ПРИНЦИПЫ ДИАГНОСТИКИ ГЕЛЬМИНТОЗОВ

По данным ВОЗ, точность диагнозов по анализам кала не превышает 5-10%.

Основным методом лабораторной диагностики этих инвазий является обнаружение яиц или личинок гельминтов.

Испражнения для анализов должны доставляться в лабораторию не позднее одних суток после их выделения, а при подозрении на стронгилоидоз - немедленно

В настоящее время преобладают малоинтенсивные инвазии, особенно при геогельминтозах, поэтому при копроовоскопии необходимо пользоваться методами обогащения.

Однако во главу диагностики еще до лабораторного обследования должны быть поставлены обязательные сведения, полученные при изучении у больного эпидемиологического, географического, социального анамнеза и анамнеза болезни.

Несмотря, на первый взгляд, казалось бы бессимптомное течение многих глисто-протозойных инвазий, у большенства инвазированных при тщательном врачебном обследовании удается выявить немаловажную симптоматику.

Поэтому результаты опроса больного, наиболее полные анамнестические данные, наличие даже легкой симптоматики в большинстве случаев на 79-80%вероятности определяют возможность постановки диагноза при таких инвазиях, как энтеробиоз, тениидозы, дифиллоботриоз, нередко при аскаридозе и описторхозе. А самое главное эти данные определяют конкретные показания к проведению лабораторной диагностики: правильному выбору методики, соответствующей подготовки больного, забору для исследования необходимого биологического материала (жидкостей или экскретов).

Большой популярностью среди основных методов исследования на сегодняшний день используются иммунологические методы диагностики, а также ПЦР - для выявления ДНК возбудителей. Иммунологические методы диагностики гельминтозов основаны на обнаружении в сыворотке крови специфических антител к тем или иным гельминтам. Для иммунологического исследования применяется метод непрямой гемагглютинации, иммуноферментного анализа, иммуноэлектрофореза, иммуноабсорбции и другие серологические методы исследований крови.

Иммунологические методы исследования применяются для диагностики альвеококкоза, эхинококкоза, цистицеркоза, аскаридоза, шистосомоза и других гельминтозов как вспомогательные в комплексе с методами клинико-инструментальной диагностики. Данные методы исследования можно считать эффективными только в том случае, когда гельминты располагаются непосредственно в тканях человеческого организма.

Биологическим материалом для исследований на наличие гельминтов, их фрагментов, личинок и яиц служат фекалии, моча, дуоденальное содержимое, желчь, мокрота, ректальная и перианальная слизь, кровь, мышечная ткань. С учетом преобладающей локализации большинства наиболее распространенных гельминтов в желудочно-кишечном тракте, чаще всего объектом исследования являются фекалии. Макроскопические методы применяют для обнаружения выделенных гельминтов или их фрагментов: головки, обрывки стробилы или отдельные членики. Целью микроскопических исследований является обнаружение яиц и личинок. В настоящее время рекомендованы к применению толстый мазок по Като-Миура, методы седиментации, методы флотации.

Нативные и концентрированные препараты фекалий: яйца гельминтов-аскарид, власоглава, карликового цепня, широкого лентеца, токсокар, трематод -кошачьей, сибирской двуусток, и т. д.

В нативных необработанных фекалиях или жидких при промывании невооруженным глазом можно обнаружить целых или фрагменты взрослых аскарид, остриц, членики бычьего цепня, свиного цепней, отрывки стробилы широкого лентеца.

В пробах мочи: яйца шистосом, трихомонады, яйца диактофим, дочерние капсулы эхинококка, при эхинококкозе почек.

В соскобах кожи с перианальной области: яйца остриц, яйца (онкосферы) теннид.

В мокроте: личинки стронгилид, аскарид, токсокар, дочерние капсулы эхинококка при эхинококкозе легких, амебы при легочном амебиазе.

В пробах дуоденального содержимого (двенадцатиперстной кишки): личинки и даже яйца стронгилид, трофозоиды лямблии, яйца трематод(кошачьей, китайской, печеночного, ланцетовидной двулисток).

В пробах спинномозговой жидкости: трипаносомы, личинки нематод ангиостронгилид.

В мазках из влагалищной слизи: трихоманады, трофозоиты кишечной амебы, иногда яйца остриц и даже взрослой особи.

В молоке матери в особых случаях: личинки стронгилид.

Нативные тканевые препараты (аспирационный материал из бронхов, костного мозга, лимфатических узлов, абсцессов, соскобы со слизистых, биопсия) путем обработки специальными методами применяется в дополнение или взамен гистологических исследований для диагностики трипаносомоза, пневмоцистоза, трихинеллеза.

Кал для анализа кала на обнаружение гельминтов необходимо собирать правильно, следуя рекомендациям:

Перед сбором воспрещено делать клизму и употреблять любые слабительные средства;

При дефекации кал следует собирать на полиэтиленовую пленку или в лоток. При этом нельзя допускать попадания на образец мочи, выделений, воды, предметов личной гигиены и пр. ;

Если в лабораторию анализы сразу отправить не получается, то хранить материал необходимо при температуре 4-8 градусов Цельсия. При этом в лабораторию анализы должны попасть в этот же день.

По возможности следует собрать несколько образцов кала, из разных дефекаций в течение одного дня.

ГЛАВА IV. МАКРОСКОПИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Осмотр фекалий при помощи лупы или невооруженным глазом.

Ход исследования. Фекалии размешивают с водой до получения равномерной суспензии, после чего при освещении тщательно просматривают небольшими пропорциями в черных фотографических кюветах или на темном фоне в чашках Петри. В случае обнаружения подозрительных частиц или когда заведомо предполагают наличие мелких форм гельминтов (например остриц), все подозрительные белые частицы пинцетом или препаровальными иглами переносят на предметное стекло в каплю глицерина, изотонического раствора хлорида натрия или воды и исследуют невооруженным глазом под лупой или под микроскопом. При обнаружении подозрительных образований, следует рассмотреть их под лупой, предварительно сжав их между двумя предметными стеклами.

Метод отстаивания. Ход исследования. Весь исследуемый материал (в данном случае свежих фекалий) помещают в высокие банки, разбавляют сильной струей воды и оставляют отстояться. Мутный слой над осадком с осторожностью переливают в другой сосуд, осадок вновь разбавляют и смесь отстаивают. Данные операции выполняются до тех пор, пока вода над осадком не станет прозрачной. Воду сливают, а осадок исследуют маленькими частями в чашках Петри на темном фоне.

Оценка полученных результатов. Дифференциальная диагностика между гельминтами основывается на их анатомо-морфологических признаках. Определение принадлежности нематод, как правило, возможно лишь по цельным особям, реже - по достаточно большим фрагментам, которые сохранили свои характерные диагностические признаки. Цестоды чаще всего диагностируют по зрелым или гермафродитным сколексам и членикам .

Микроскопические методы исследования

Целью микроскопических методов является выявление яиц и личинок гельминтов. Данные методы подразделяются на качественные и количественные.

ГЛАВА V. КАЧЕСТВЕННЫЕ МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

.1 Нативный мазок

Метод предложенный Давеном в 1853г. - один из самых старых и самых простых методов данной группы, но в литературе имеются многочисленные высказывания, указывающие на его низкую эффективность, по сравнению с другими методами.

МЕТОДЫ ОБНАРУЖЕНИЯ ГЕЛЬМИНТОВ.

Аскаридоз можно обнаружить методами: копроовоскопические мазок на Като, унифицированные методы обогащения Фюллеборна, Калантарян и др. флотационные методики.

5.2 Метод Като

Метод Като (толстый мазок с целлофаном) - последователь нативного мазка. Данный метод очень удобен при массовых обследованиях, мазки могут быть приготовлены на месте. Этот метод основывается на выявлении гельминтов в просветленном глицерином и окрашенном малахитовой зеленью мазке фекалий. Чтобы осуществить этот метод, необходим целлофан смесь Като, состоящая из 6 миллилитров 3% раствора малахитовой зелени в воде, 500 миллилитров глицерина, 500 миллилитров 6% раствора фенола.

Ход исследования. Целлофановые полоски меньше предметного стекла вырезают из гидрофильного целлофата и предварительно обрабатывают, погружая их в раствор Като: глицерин размягчает целлофан, осветляет препарат и предохраняет его от высыхания; фенол используется для защиты лаборанта от патогенных бактерий; малахитовая зелень уменьшает напряжение глаз. Полоски располагаются в растворе Като так, что они прилежат друг к другу (3-5 мл на 100 полосок). Через 24 часа полоски готовы к дальнейшим действиям. Они могут очень продолжительное время храниться в указанной смеси, в герметичной посуде.

миллиграмм фекалий укладывают на предметное стекло толстым слоем, накрывают полоской целлофана и придавливают на предметном стекле резиновой пробкой таким образом, чтобы фекалии не выдавились из-под целлофана.

Исследование мазка следует проводить не позже чем через час после его приготовления. За небольшой промежуток времени (в течении часа) при комнатной температуре мазок становится более прозрачным.

При отсутствии реактивов для приготовления смеси Като ее можно заменить 50% водным раствором глицерина.

Выявление яиц проводится под микроскопом во всем толстом мазке.

Диагностическое значение. Наиболее эффективен метод Като для диагностики тениаринхоза. Так же можно выявить яйца аскарид, власоглавов, трематод и других. Но данный метод не эффективен в диагностике гименолепидоза, анкилостомидозов и трихостронгилоидоза.

.3 Методы, основанные на принципе осаждения яиц

Данные методы в настоящее время не рекомендуются в качестве унифицированного из-за малой их эффективности или громоздкости. Из этой группы методов выделяется метод исследования фекалий на яйца гельминтов с использованием синтетических детергентов (синтетических моющих средств типа «Лотос»). Под действием поверхностно-активных веществ, входящих в состав детергентов, яйца гельминтов освобождаются от кала и концентрируются в осадке.

В качестве реактива используют 1 % раствор стирального порошка (порошок высушивают в сушильном шкафу при 100 °С в течение 1-2 ч, 10 г порошка растворяют в 1 л водопроводной воды).

Существуют две методики:

методика - В склянку емкостью 30-50 мл наливают 20-30 мл раствора детергента, туда же помещают порцию кала размером с лесной орех. Кал для исследования желательно помещать в раствор детергента не позже чем через 1 ч после дефекации. Соотношение раствора и кала примерно 1: 2. Кал должен находиться в растворе не менее суток. За это время на дне флакона образуется двух-, трехслойный осадок. Нижний слой состоит из грубых тяжелых частиц, в среднем слое концентрируются яйца гельминтов, на которые иногда оседают легкие хлопья. Пастеровскую пипетку с высоко отбитым концом вводят в средний слой осадка, возможно более низко, но не касаясь дна склянки, набирают одну-три капли жидкости и переносят их на предметное стекло. Каплю накрывают покровным стеклом или целлофановой пластинкой по Като и исследуют под микроскопом. На одном стекле должно быть приготовлено два препарата.

методика - Кал помещают в раствор детергента в соотношении примерно 1: 10 и перемешивают до образования суспензии. Через 30 мин содержимое пробирки встряхивают 1-2 мин и центрифугируют 5 мин при 1000-1500 об/мин. Из осадка готовят два препарата на одном предметном стекле.

Просматривают под микроскопом полностью оба препарата, учитывая все обнаруженные яйца гельминтов.

Диагностическое значение: Данным методом можно выявить яйца всех видов гельминтов.

Метод Фюллеборна. Данный метод основан на всплывании яиц гельминтов в насыщенном растворе NaCl с высокой относительной плотностью. Для этого растворяют 400 г NaCl в 1 л воды при кипячении. Относительная плотность раствора 1, 18-1, 22. Раствор хранят в закрытой бутыли.

Для проведения анализа в банку объемом 30-50 мл помещают 2-3 г испражнений и при помешивании палочкой доливают почти доверху насыщенный раствор хлорида натрия. Полоской бумаги быстро удаляют всплывшие крупные частицы.

Через 45-60 мин. отстаивания проволочной петлей снимают поверхностную пленку и переносят ее на предметное стекло в каплю 50% водного раствора глицерина. Готовят несколько препаратов. Дополнительно просматривают 2-4 препарата из осадка, набирая его глазной пипеткой на 2 предметных стекла.

Необходимость исследования осадка обусловлена тем, что яйца трематод и тениид всплывают очень плохо и могут остаться в осадке. Хорошо всплывают яйца нематод (за исключением неоплодотворенных яиц аскарид), карликового цепня и лентеца.

К достоинствам этого метода относится его дешевизна и доступность к недостаткам - необходимость просмотра препаратов из поверхностной пленки и осадка, а также длительность отстаивания.

.4 Методы обогащения, основанные на принципе всплывания яиц

Методы этой группы основаны на всплывании яиц гельминтов в растворе, имеющем по сравнению с ними большой удельный вес.

Метод Калантарян. Кал суспензируютво флотационном растворе, имеющем большую относительную плотность, чем яйца гельминтов. При этом яйца гельминтов всплывают на поверхность, образовавшуюся пленку исследуют под микроскопом.

В качестве реактива используют флотационный раствор по Калантарян (1 кг нитрата натрия растворяют в 1 л воды, кипятят смесь до образования пленки и переливают без фильтрования в сухие бутылки; относительная плотность раствора 1, 38) либо флотационный раствор по Брудастову - Красноносу (900 г нитрата натрия и 400 г нитрата калия растворяют при подогревании в 1 л воды; относительная плотность раствора 1, 47-1, 48).

Недостаток метода - высокая стоимость азотнокислого натрия.

Метод Горячева. Данный метод(метод осаждения) используется для диагностики описторхоза. Удельный вес яиц описторха высок, поэтому они не всплывают в солевых растворах. В цилиндр диаметром 2-3 см наливают 70-100 мл насыщенного раствора хлорида натрия.

Отдельно тщательно размешивают 0, 5 г испражнений в 20-25 мл воды и осторожно фильтруют через воронку с двумя слоями марли в цилиндр на солевой раствор, избегая перемешивания. Яйца описторхов медленно оседают на дно цилиндра.

Через 2-3 часа верхний слой с калом отсасывают пипеткой, а оставшийся солевой раствор оставляют стоять на 12-20 часов или центрифугируют. Осадок пипеткой переносят на предметное стекло, покрывают покровным стеклом и микроскопируют. Этот метод применим и для диагностики других трематодозов.

.5 Методика обнаружения яиц гельминтов в кале методом обогащения

В химических стаканах тщательно размешивают стеклянной палочкой 5-10 г кала и 100- 200 мл одного из флотационных растворов. Сразу же после окончания размешивания удаляют стеклянной палочкой всплывшие на поверхность крупные частицы. К поверхности солевого раствора прикладывают предметное стекло. Если между смесью и предметным стеклом остается пустое пространство, то добавляют солевой раствор до полного соприкосновения смеси с предметным стеклом.

Оставляют для отстаивания на 20-30 мин, после чего предметное стекло снимают, кладут под микроскоп пленкой кверху и просматривают без покровного стекла всю пленку, прилипшую к поверхности предметного стекла. Во избежание высыхания во время исследования пленку можно смешать с двумя-тремя каплями 50 % раствора глицерина.

Учитывают все обнаруженные в препарате яйца гельминтов.

Диагностическое значение: описанным методом можно выявить заражение аскаридами, власоглавами, анкилостомидами, тениидами, трематодами, лентецами и другими видами гельминтов.

5.6 Флотационные методы

В настоящее время для диагностики описторхоза (клонорхоза) рекомендуют методы Като и Калантарян, как достаточно эффективные и технически более простые.

5.7 Метод липкой ленты

Метод липкой ленты используется для диагностики энтеробиоза. Кусочек липкой прозрачной полиэтиленовой ленты длиной 4-5 см липким слоем прикладывают через анус к перианальным складкам, сразу же снимают и приклеивают на предметное стекло. Полученные таким образом препараты микроскопируют.

Преимущества этого метода перед соскобом с перианальных складок заключается в быстроте и возможности довольно долгого хранения препаратов.

ГЛАВА VI. КОЛИЧЕСТВЕННЫЕ МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Количественные методы исследования применяются при определении интенсивности инвазии, оценке эффективности различных антигельминтных препаратов, определении качества дегельминтизации, контроле проводимых массовых лечебно-профилактических мероприятий и др.

Количественное определение яиц гельминтов исследуется двумя методами: методом Столла и методом Красильникова и Волковой (1974).

.1 Метод Столла

Метод стола используется при аскаридозе. Необходимое оборудование: микроскоп, стеклянная колба с отметкой 56 и 60 миллилитров, мерный цилиндр, стеклянные бусы, резиновая пробка для колбы, градуированные пипетки, предметные стекла и 0, 4% раствор едкого натра.

Ход исследования. В колбу с мерным цилиндром наливают децинормальный раствор едкого натра до отметки 56миллилитров и добавляют испражнения до тех пор, пока уровень жидкости не поднимается до отметки 60 миллилитров (получается 4 миллилитра испражнений). Данную смесь взбалтывают со стеклянными бусами на протяжении одной минуты, предварительно закрыв колбу резиновой пробкой (можно перемешать и палочкой). Сразу после взбалтывания набирают градуированной пипеткой 0, 075 миллилитров смеси (в ней содержится 0, 005 миллилитров испражнений), переносят на предметное стекло и подсчитывают количество яиц в препарате под микроскопом. Для того, чтобы определить количество яиц в 1 грамме испражнений, обнаруженное число умножают на 200.

Сравнение числа яиц в пробе, обнаруженное у больного перед лечением и после него, позволяет рассуждать об эффективности дегельминтизации.

Данный метод довольно прост и даёт сравнимые результаты при всех гельминтозах, возбудители которых систематически выделяют яйца в кишечник больного. Однако метод имеет весомый недостаток - относительно низкая чувствительность, особенно при слабой интенсивности инвазии.

.2 Метод Красильникова-Волковой

При исследовании этим методом берут не менее 1 грамма испражнений и смешивают в стеклянной колбочке или большой пробирке с 1% раствором «Лотоса» (можно взять 1, 5% раствора «Экастра») в отношении 1: 10. Взвесь тщательно взбалтывают до образования гомогенной суспензии, сразу после этого набирают градуированной пипеткой 0, 1 миллилитр взвеси (примерно равняется 0, 01 грамм фекалий) и переносят на предметное стекло. Данный препарат покрывают покровном стеклом или целлофановой пластинкой (20 х 30 мм), выдержанной не менее одних суток в 50% водном растворе глицерина.

Подсчитывается число яиц во всем препарате под микроскопом. Чтобы рассчитать количество яиц в одном грамме испражнений полученное число умножают на 100.

Данный метод более эффективен, чем метод Столла. Во-первых, он более чувствителен и позволяет обнаруживать гельминтов при слабой степени инвазии. Во-вторых, он очень удобен при массовых обследованиях, так как растворы детергентов, являются консервантами яиц гельминтов, позволяют проводить исследования и не совсем свежего материала. Однако обязательным условием при этом является сбор фекалий непосредственно в раствор детергента.

Для количественного исследования можно применять любой из описанных унифицированных качественных методов, основанных на принципе всплывания яиц. Но в этом случае для анализа должно быть взято одно и то же количество фекалий, один и тот же объем флотационного раствора. Расчет степени инвазии можно произвести, зная количество яиц в 1 грамме фекалий.

ГЛАВА VII. МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИПРОТОЗОЙНЫХ ИНВАЗИЙ

.1 Нативный мазок

На предметное стекло наносят по 1-2 капли изотоничского раствора в двух местах с небольшим промежутком.

Деревянной палочкой из пробы фекалий выбирают небольшой кусочек и переносят в каплю на предметное стекло, размешивая до образования однородной массы. Далее сверху кладут покровное стекло и рассматривают под микроскопом.

Через хорошо приготовленный препарат должен быть виден печатный текст.

При исследовании кала у больных обнаруживаются просветные формы - цисты. В остром периоде болезни обнаруживаются большие вегетативные формы амеб - эритрофаги (гематофаги), которые быстро погибают во внешней среде. Данные приведены ниже:

Вид инвазииЧисло яиц в 1г фекалийЧисло гельминтов в кишечникеСтепень инвазииАскаридоз1-10001-10Слабая10001-5000011-50Умеренная50001-1900051-200ТяжелаяСвыше 190000Свыше 200ОченьтяжелаяТрихоцефалез1-20001-25Оченьслабая2001-750026-100Слабая7501-37500101-500Умеренная37501-75000501-1000ТяжелаяСвыше 75000Свыше 1000ОченьтяжелаяАнкилостомоз1-25001-25Оченьслабая2501-1000026-100Слабая10000-50000101-500Умеренная50001-100000501-1000ТяжелаяСвыше 100000Свыше 1000ОченьтяжелаяНекатороз1-6001-25Оченьслабая601-210026-100Слабая2101-11000101-500Умеренная11101-22100501-1000ТяжелаяСвыше 22100Свыше 1000Оченьтяжелая

При серологическом исследовании определяют наличие антител к гельминтам (достоверность - около 60 %): при подозрении на эхинококкоз, цистицеркоз, трихинеллез, токсокароз широко используют реакции непрямой гемагглютинации, агглютинации латекса, связывания комплемента, иммунофлюоресценции.

Не во всех случаях методы определения специфических антител обладают достаточной специфичностью и достоверностью. Антигенный состав гельминта зависит не только от вида, но и от стадии; проходя сложный цикл развития от яйца до взрослой особи, гельминты меняют антигенный состав. Кроме того, в иммунодиагностических реакциях используются соматические антитела, а в организме хозяина антитела вырабатываются в основном на экскреты и секреты гельминта. Неспецифическая сенсибилизация организма, общность некоторых антигенов трематод, простейших и человека создают высокий удельный вес ложноположительных реакций в титрах ниже достоверно диагностических.

Метод определения гельминтов с помощью полимеразной цепной реакции является высокоспсцифичным и высокочувствительным, но из-за дороговизны и сложности не может быть скрининговым, когда, например, нужно обследовать группу детей из детского учреждения.

Иммунная система не всегда реагирует (распознает и уничтожает) но наличие гельминтов в организме. Это объясняется тем, что некоторые гельминты имеют прочною и химически устойчивую капсулу, или покрыты веществом, которое не распознается иммунной системой; локализуются в тканях, наиболее защищенных от воспалительных реакций, например в спинном мозге; многие виды из них в пищеварительном тракте выделяют антиэнзимы, что спасает их от гибели; имеют большую продолжительность жизни (годами, а иногда до смерти самого человека); питаются за счет гликолиза чистых углеводов; имеют такие приспособления, как присоски, крючки и др. , что способствует фиксации внутри организма; у многих видов существует половое размножение, при котором происходит обмен генной информацией, что приводит к усилению гетерогенной популяции, уменьшению уязвимости; обладают высоким уровнем плодовитости. Данные методы исследования можно считать эффективными только в том случае, когда гельминты располагаются непосредственно в тканях человеческого организма. В данном случае применяют: кожную и внутрикожную пробу, реакцию кольцепреципитации, непрямую гемагглютинацию и так далее.

В крови инвазированных лиц происходит увеличение титров специфических антител, сначала IgM-, а затем IgG-классов. Если это не реинвазия, то в организме больного с аллергическими проявлениями еще отсутствуют гельминты в репродуктивной стадии развития, и диагностика гельминтоза невозможна. Период созревания гельминта может быть достаточно продолжительным и зависит от многих факторов. !!! На этой стадии диагностика заболевания возможна только по выявлению антител к антигенам гельминта. Использование высокочувствительного метода иммуноферментного анализа с этой целью оказалось весьма эффективным.

Иммунологические методы используют для выявления шистосомоза, альвеококкоза, цистицеркоза, эхинококкоза, аскаридоза и прочих видов гельминтов.

Сопутствующие обследования также могут подтвердить гельминтозы. Гельминтозы нередко проявляются в анализе на дисбактериоз и общем анализе крови (низкий гемоглобин, повышенная СОЭ, эозинофилия).

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

В настоящее время нет простого, доступного и надежного метода диагностики гельминтозов. Выбор того или иного метода зависит от вида гельминта, а также стадии заболевания.

В заключении хочется напомнить о том, что диагностика любого

Важное значение на сегодняшний день в связи с сложившейся ситуацией следует уделить профилактике.

Профилактика гельминтозов включает комплекс мероприятий по выявлению больных, их лечение, обеспечение условий жизни, быта и производства, исключающих распространение этих болезней, охрану и оздоровление окружающей среды от возбудителей. Объем и характер проводимых мероприятий по снижению заболеваемости наиболее распространенными среди населения Российской Федерации геогельминтозами определяются уровнем пораженности, климатическими условиями, особенностями быта и хозяйственной деятельности населения и результатами санитарно-гельминтологического мониторинга, так как геогельминтозы - это в первую очередь санитарная проблема. В основе профилактики трихинеллеза, тениаринхоза, тениоза лежит обеспечение безопасности для здоровья человека мясной продукции, а предупреждение описторхоза, дифиллоботриозов, и других гельминтозов, передающихся через рыбу, ракообразных, моллюсков и пресмыкающихся, состоит в обеспечении гарантированной безопасности рыбной и другой соответствующей продукции. Профилактика и борьба с эхинококкозом и альвеококкозом осуществляется с помощью мер, направленных на предупреждение заражения человека, сельскохозяйственных животных, собак; необходимы санитарное просвещение, проведение регулярного медицинского обследования контингентов риска (оленеводов, звероводов, охотников). В профилактике гельминтозов, передающихся контактным путем (энтеробиоз), основное значение имеют меры, направленные на разрыв механизма передачи их возбудителей, при этом следует учитывать, что эти гельминтозы преимущественно поражают детей в организованных коллективах.

Необходимо соблюдать меры личной профилактики - мыть руки перед едой, после посещения туалета, возвращения с улицы домой, после контакта с животными. Ягоды, овощи, фрукты, зелень нужно тщательно промыть проточной водой и ополаскивать кипяченой водой. Нельзя пробовать сырой мясной или рыбный фарш. Рыбу, морепродукты, мясо следует хорошо прожаривать, тушить или варить. Необходимо помнить о своих домашних животных - не вскармливать им сырую рыбу, мясо, внутренние органы животных, проводить периодически их профилактические лечение (дегельминтизацию).

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. М. В. Северин, Д. Н. Понамарев, В. М. Борзунов, Т. Б. Третьякова. Методы диагностики наиболее распространенных протозоозов и гельминтозов Екатеринбург 1996г. -71с.

А. М. Бронштейн, Н. А. Малышев. »Гельминтозы человека» Москва 2010 г. -109с.

Методическое пособие Гельминтозы в практике педиатра Москва 2008г. -30с.

Http: //doctorspb. ru/ медицинский портал для врачей и студентов.

Биология под редакцией академика РАМН, профессора В. Н. Ярыгина: Том 2. Москва издательская группа «ГЭОТАР-Медиа», 2012 - 553с.

Слюсарев А. А. , Жукова С. В. - К. : Вищашк. Головное издательство, 1987-415с.

Http: //www. pasteur-nii. spb. ru/ Гельминтология

12. http: //www. rusnauka. com/17_APSN_2013/Biologia/10_140855. doc. htm

клинико-патогенетические особенности и современное состояние диагностики, лечения Гельминтозов человека

Http: //fersirs. ucoz. ru/news/klassifikacija_gelmintov_klassifikacija_gelmintozov_po_voz/2013-12-19- Классификация гельминтов.

Репетиторство

Нужна помощь по изучению какой-либы темы?

Наши специалисты проконсультируют или окажут репетиторские услуги по интересующей вас тематике.
Отправь заявку с указанием темы прямо сейчас, чтобы узнать о возможности получения консультации.

Подразделяются простейшие на 4 класса:

При инцистировании микроорганизм приобретает округлую форму и покрывается защитной оболочкой. В форме цисты простейшие становятся маловосприимчивыми к неблагоприятным факторам среды.

Исследованию могут подвергаться:

Обратите внимание: разновидностей диагностики очень много, мы рассмотрим те виды, которые наиболее распространены в клинической лабораторной практике.

Частные виды диагностики

В каждом конкретном случае перед лаборантом ставится задача нахождения определенного возбудителя, иногда попутно с основным обнаруживаются и другие.

Насчитывается 6 видов этого микроорганизма, способного к обитанию в кишечнике человека. Клиническое значение имеет только дизентерийная амёба, встречающаяся в вегетативной форме и в виде цист.

Дополнительно применяются иммунологические методы:

• непрямой иммунофлюоресценции;
• непрямой агглютинации (РНА);
• радиальной иммунодиффузии.

Обратите внимание: серологические методы малоинформативны и применяются лишь как дополнение к основным в сомнительных случаях.

Диагностика ресничных (инфузорий)

Патогенная форма микроорганизмов этого рода – балантидий. Это микроб, вызывающий балантидиаз – болезнь, сопровождающуюся язвенным процессом толстого кишечника. Возбудитель обнаруживается в нативном мазке в виде вегетативной формы и цисты. Материал для мазка (кал и слизь) забирается при ректороманоскопическом исследовании и высевается на специальные среды.

Диагностика жгутиконосцев (лейшманий, лямблий, трипаносом, трихомонад)

Для человека представляют опасность лейшмании, трипаносомы, лямблии, трихомонады.

Лейшмании – микробы, вызывающие лейшманиоз, исследуются в мазках крови, материалах костного мозга, соскобов из кожных инфильтратов. В некоторых случаях при диагностике лейшманий применяется посев на питательные среды.

Трипаносомы – возбудители сонной болезни (американский/африканский трипаносомоз, или болезнь Шагаса).

Африканский вариант определяют в начальном периоде при исследовании периферической крови. Патологические микробы при прогрессировании болезни находятся в материале пункций лимфоузлов, в запущенных стадиях – в спинномозговой жидкости.

Для диагностики трипаносом при подозрении на болезнь Шагаса исследуемый материал обследуется под микроскопом при малом увеличении. При этом мазки и толстую каплю предварительно окрашивают.

Трихомонады (кишечная, ротовая, ) обнаруживаются при микроскопии материалов, взятых из пораженных слизистых оболочек.

Выявление споровиков (малярийного плазмодия, возбудителя кокцидоза и пр.)

Наиболее распространенный и опасный для человека вид – малярийный плазмодий, имеющий 4 основные разновидности возбудителя: возбудитель трехдневной малярии, четырехдневной малярии, тропической малярии и малярии овале.

Половое развитие плазмодия (спорогония) проходит в комарах Анофелес. Бесполое (тканевая и эритроцитарная шизогония) – в печеночной ткани и эритроцитах человека. Эти особенности жизненного цикла обязательно учитываются при диагностике малярийного плазмодия.

Так, у только что заболевшего больного в крови можно обнаружить половые клетки цикла спорогонии. А вот на высоте малярийных приступов в крови в большом количестве появляются шизонты.

Более того, в разные фазы малярийной лихорадки проявляются различные формы плазмодия:

• в период озноба кровь наполняется мерозоитами, разновидностью шизонтов;
• на высоте температуры в эритроцитах скапливаются кольцевидные трофозоиты;
• снижение температуры характеризуется преобладанием амебовидных трофозоитов;
• в периоды нормального состояния кровь содержит взрослые формы шизонтов.

Исследование возбудителя малярии (малярийного плазмодия) проводится в мазке и в толстой капле.

Обратите внимание: диагностика малярии при исследовании мазков и толстых капель крови иногда бывает ошибочной. Тромбоциты крови в некоторых случаях могут ошибочно быть причислены к малярийному возбудителю. Также иногда симулируют плазмодий фрагменты лейкоцитов и других клеток.

Основные методы исследования простейших

Кратко ознакомимся с самыми распространенными методами исследования на наличие простейших.

Диагностика простейших методом нативного мазка и мазка, окрашенного раствором Люголя (в кале)

Препарат готовится из эмульсии кала в изотоническом растворе. На предметное стекло наносятся две капли натрия хлора и рядом раствор Люголя. В оба состава деревянной палочкой добавляют исследуемый материал и после накрывания стеклом просматривают в разных разрешениях микроскопа.

По определенным признакам регистрируют найденных простейших. Для точности готовят 2-3 препарата из одного материала. В сомнительных случаях анализ повторяют несколько раз на протяжении 2-3-х недель.

Методом можно обнаружить вегетативные и цистные формы:

• лямблий;
• балантидий;
• дизентерийной амебы.

Вместе с патогенными формами определяются и непатогенные простейшие. Также у здоровых носителей находятся просветные и цистные формы.

Важно: исследования во избежание неточностей и ошибок следует проводить неоднократно.

Результат диагностики простейших методом нативного и окрашенного мазка должен содержать описание формы возбудителя (просветная, циста, тканевая).

Требования к исследованию:

• забранный на анализ материал (жидкий кал) исследуется не позднее 30 минут после дефекации;
• оформленный кал необходимо подвергнуть диагностике в течение 2 часов после дефекации;
• в материале не должно быть примесей (дезинфицирующих средств, воды, мочи);
• для работы с материалом используют только деревянные палочки, стеклянные не пригодны из-за соскальзывания слизи;
• палочки после использования немедленно необходимо сжигать.

Метод консервации (исследование кала) при диагностике простейших

Исследование проводится путем фиксации простейших с консервантом. Отличие этого метода от предыдущего в том, что консерванты позволяют сохранить препарат в течение длительного периода.

Используемые консерванты:

• Барроу. Содержит консервирующие ингредиенты: 0,7 мл хлорида натрия, 5 мл формалина, 12,5 мл 96% спирта, 2 г фенола и 100 мл дистиллированной воды. Красящий состав: 0,01% раствор тионина (азура).
• Раствор Сафарлиева. Состав: 1,65 г сульфата цинка, 10 мл формалина, 2,5 г кристаллического фенола, 5 мл уксусной кислоты, 0,2 г метиленового синего, 100 мл воды. Этот консервант используется в случаях, когда материал должен храниться более месяца.

Консервантом наполняются пустые флаконы, в них переносят материал, в пропорциях 3:1, затем при необходимости добавляют краситель. Оценка результатов производится при исследовании 2-3-х препаратов.

Метод формалин-эфирного обогащения (анализ на наличие простейших в кале)

Этот способ диагностики позволяет отделить и сконцентрировать цисты простейших. Для анализа нужны следующие ингредиенты: формалин (10 мл), 0,85 г изотонического раствора, дистиллированная вода, серный эфир, раствор Люголя.

Смесь биоматериала с перечисленными жидкостями смешивают и центрифугируют. Полученный на дне пробирки осадок окрашивают раствором Люголя и исследуют на предмет наличия цист и вегетативных форм.

Метод нахождения лейшманий (мазок костного мозга)

Для диагностики лейшманиоза используются реактивы: смесь Никифорова (серный эфир и этиловый спирт), фосфатный буфер, Азур-эозин по Романовскому.

Вещество костного мозга очень осторожно помещают на предметное стекло после специальной подготовки. Используется микроскоп с иммерсионной системой.

В острый период болезни в пунктате обнаруживается большое количество лейшманий.

Обратите внимание: иногда кровяные клетки могут напоминать обработанные лейшмании, поэтому очень важно лаборанту быть внимательным и иметь достаточный опыт для самостоятельного исследования.

Метод обнаружения лейшманий в мазке из кожного инфильтрата

Необходимые реактивы аналогичны предыдущему анализу.

Исследуемый материал получают из имеющегося бугорка или язвенного содержимого. Соскоб при подозрении на лейшманиоз делается очень аккуратно скальпелем, без крови. Затем готовится препарат на стекле. Для точности получаемых результатов одновременно подвергают осмотру несколько препаратов.

При наличии заболевания среди присутствующих в исследуемом материале макрофагов, фибробластов, лимфоидных клеток определяются и лейшмании.

Метод выделения чистой культуры лейшманий, полученных путем соскоба патологических тканей

При этом способе диагностики простейших соскоб тканей помещают в специальную питательную среду, в которой происходит активное размножение лейшманий.

Перед забором соскоба кожу тщательно обрабатывают спиртом, затем делается надрез бугорка, со дна которого извлекается содержимое и помещается в пробирку со средой. Материал забирается несколько раз, после чего он помещается в разные пробирки. Затем в термостате при температуре 22-24 градуса происходит культивирование. Результаты оценивают под микроскопом. Этот метод применяется, когда другие, более дешевые и быстрые способы диагностики простейших неэффективны.

Увидеть, как на практике расшифровываются анализы на наличие простейших по капле крови, вы сможете, посмотрев видео-обзор:

Лотин Александр, медицинский обозреватель

Исходный уровень знаний и навыков.

Учащийся должен знать:

1. Представителей трема­тод описторха, парагонима, фасциолу, дикроцелия.

2. Жизненные циклы, пу­ти заражения трема­тод, клиническую картину болезни, сроки хранения фекалий

Учащийся должен уметь:

1. Определить яйца трематод по ри­сункам, таблицам.

2. Формировать меры про­филактики.

3. Приготовить нативный мазок, большой мазок, мазок по Като, оценить свою работу, работать с микроскопом.

4. Опре­делять яйца трематод в препаратах, соблю­дать правила охраны труда, соблюдать правила сан.-эпид. режима.

Структура занятия:

Теоретическая часть:

Ø Микролекция.

Практическая часть:

Ø Приготовление нативного мазка, большого мазка, мазка по Като, оценка работы, микроскопия

Микролекция.

Сбор и доставка материала

Окончательный диагноз гельминтозов может быть установлен только с учетом результатов лабораторных исследований. Основным методом лабораторной диагностики гельминтозов является обнаружение яиц или личинок гельминтов в фекалиях, моче, крови и других биологических жидкостях при микроскопическом исследовании. Материалами для исследований служат испражнения, содержимое двенадцатиперстной кишки, кровь, мокрота, биопсированные ткани и другие материалы.

Сбор материала для исследования производят в чистую стеклянную или пластиковую посуду, которая сопровождается направлением с указанием ФИО обследуемого. При массовом обследовании допускается сбор фекалий в стаканчики из парафинированной бумаги, целлофановые пакеты.

Испражнения для анализов должны доставляться в лабораторию непозднее одних суток, а при подозрении на стронгилоидоз - немедленно после их выделения. При нарушении этого правила постановка диагноза в связи с разрушением яиц или личинок нередко становится трудной или невозможной.

Для выявления яиц и личинок некоторых видов гельминтов используют специальные методы: метод Бормана, перианальный соскоб, метод мазков-отпечатков с помощью липкой ленты, культивирование личинок на фильтровальной бумаге (метод Харада и Мори) и др.

Практическая часть:

Наиболее распространенным методом исследования фекалий на наличие в них яиц гельминтов являются методы нативного мазка, толстого мазка под целлофаном и большого мазка.

При изучении яиц гельминтов под микроскопом целесообразно сопоставлять видимое изображение с его характеристикой в определителе яиц гельминтов.

Метод нативного мазка

Оборудование:

предметные стекла;

широкая кювета;

пластиковые палочки;

карандаш;

50 %-ный водный раствор глицерина (смешивают равные части глицерина и дистиллированной воды);

сосуд с 0,5% -ным раствором полидеза;

микроскоп.

Ход работы

1. Разложить предметные стекла в кювете, пронумеровать предметные стекла.

2. Нанести пипеткой по 2 капли 50 %-ного водного раствора глицерина на расстоянии 4 см одна от другой на предметные стекла.

3. Взять палочкой кусочек фекалий, размером со спичечную головку (30-50 мг), внести его в каплю глицерина и растереть до равномерной суспензии.

4. На каждом стекле готовят по два нативных мазка, которые не должны сливаться между собой и не доходить до краев, чтобы не испачкать пальцы лаборанта. Для каждой пробы используют новые палочки.

5. Препараты, не накрывая покровными стеклами, исследовать под микроскопом (объектив 8х, окуляр 10-15х).

6. По окончании исследования погрузить препараты в сосуд с 0,5% -ным раствором полидеза.

Метод толстого мазка под целлофаном.

Метод предложен К. Като, М. Миуром в 1954 г. Мазок представляет собой слой неразбавленных фекалий на предметном стекле, спрессованный под листком тонкого гигроскопического целлофана, пропитанного глицерином.

Рис. Приготовление толстого мазка под целлофаном:

а - нативный мазок; б - придавливание резиновой пробкой комочка фекалий, покрытых целлофаном; в - толстый мазок под целлофаном (по Ю.А. Березанцеву и Е.Г.Автушенко, 1976)

Оборудование:

широкая кювета;

полоски целлофана 22x30 мм, обработанные смесью Като в течение 24 ч;

смесь Като (3 % -ный раствор малахитового зеленого -6 мл, 6 % -ный раствор фенола - 500 мл, глицерин - 500 мл, 3,5 мл смеси хватает на 100 полосок);

резиновые пробки крупные;

пинцет анатомический;

пластиковые палочки;

карандаш;

микроскоп.

Ход работы

1. Разложить в кювете предметные стекла, пронумеровать предметные стекла.

2. Набрать палочкой фекалии размером с полгорошины (50-60 мг) и поместить на предметное стекло в центр.

3. Достать из банки пинцетом целлофановую полоску, обработанную по Като, и наложить на пробу кала на предметном стекле.

4. Придавить целлофан резиновой пробкой, чтобы кал распределился равномерно, не вытекая за края полоски.

5. Оставить препарат до просветления на 60 мин и затем исследовать под микроскопом (объектив 8-40х, окуляр 10х).

6. По окончании исследования препарат опустить в сосуд с 0,5 %-ным раствором полидеза.

7. Убрать рабочее место, вымыть руки.

Метод большого мазка.

Метод был предложен Ю.А. Березанцевым и Е.Г. Автушенко в 1973 г. Суть метода основывается на применении бинокулярного микроскопа и нативного мазка на стекле 6x9 см, позволяющего одномоментно исследовать до 200-300 мг кала.

Оборудование:

предметные стекла 6x9 см и 7x10 см;

пластиковые палочки;

50 %-ный раствор глицерина (глицерин и дистиллированная вода в равных частях);

сосуд с 0,5 %-ным раствором полидеза;

микроскоп;

эмалированная кювета;

карандаш.

Ход работы

1. Разложить предметные стекла 7x10 см в кювете, пронумеровать предметные стекла.

2. Затем на каждое предметное стекло положить второе предметное стекло 6x9 см.

3. Нанести пипеткой на предметное стекло размером 6x9 см 15-20 капель 50 % -ного раствора глицерина.

4. Взять палочкой из разных мест кусочки кала величиной со среднюю горошину (200-300 мг) и опустить его в раствор 50 %-ного глицерина на предметном стекле.

5. Растереть палочкой кусочек кала в глицерине до равномерной суспензии, чтобы занимаемая им площадь составляла около 33-34 см 2 . Мазок не покрывать покровными стеклами.

6. Взять большое покровное стекло 7x10 см за края вместе с находящимся на нем большим мазком (чтобы не запачкать пальцы).

7. Исследовать большой мазок при увеличении 34х (объектив 2х, окуляр 17х) и 50х (объектив 4х, окуляр 12,5х). В сомнительных случаях исследования проводят на большом увеличении.

8. По окончании исследования препарат опустить в сосуд с 0,5 %-ным раствором полидеза.

9. Убрать рабочее место, вымыть руки.

При таком методе исследования определяются крупные яйца гельминтов (аскариды, власоглава, анкилостомид, острицы, лентеца широкого, тениид, фасциолы). Они выглядят несколько иначе, в связи с чем необходим некоторый опыт, чтобы их быстро обнаружить. Большие мазки можно применять для исследования на яйца шистосом и личинок угрицы кишечной. Большой мазок содержит в 6-10 раз больше исследуемого материала, чем нативный мазок. Во столько же раз выше его эффективность.

Похожая информация.