Бактериологическое исследование: о чем говорят анализы? Что такое бактериологическое исследование, как оно проводится, расшифровка результатов.

БАК анализ мочи – один из самых эффективных и точных видов диагностики ее пробы. Используется для выявления различного рода инфекций мочевыделительной системы организм человека. Такая система состоит из пары почек, мочеточников, мочевого пузыря и уретры. Основной функцией мочевыделительной системы организма человека является процесс образования мочи, а также ее накопление и вывод во внешнюю среду.

Что это такое?

Как было отмечено выше,бактериологический анализ мочи дает возможность определить наличие инфекций в организме. Его основным отличием от других видов исследования является срок проведения, который составляет десять дней. Моча в лабораторных условиях помещается в агар или сахарный бульон, то есть в благоприятную для бактерий питательную среду. Она помогает их росту и развитию.

При БАК анализе мочи концентрация (количество) микроорганизмов в одной единице объема биоматериала устанавливается на колониеобразующих единицах (КОЕ). Они представляют собой одну живую клетку микробов, которая дальше вырабатывает уже целую колонию микроскопических организмов.

Такой вид диагностики мочи является самым достоверным. Он может предоставить данные, которые невозможно получить при иных исследованиях мочи. Но также отмечен и его недостаток. Он заключается в длительности проведения исследования, а также высоких требованиях при сборе материала.

Показания к анализу

  • инфекций мочевыделительной системы;
  • контроля лечебной терапии;
  • уточнения выявленного заболевания;
  • рецидива текущего заболевания;
  • беременности;
  • сахарного диабета и иммунодефицита;
  • предположений на устойчивую флору к лечению антибиотиками.

Подготовка к анализу

Забор материала производится в стерильную пластиковую тару. Это должна быть утренняя средняя порция мочи (три-пять миллилитров). Емкость для сбора материала человеку выдается в лаборатории. А сама процедура забора мочи должна проводиться после правильного гигиенического туалета половых органов. При этом следует исключить антисептики. Материал для диагностики собирается до начала курса лечения препаратами антибиотиков или же в его промежутках. После такого лечения должно пройти две-три недели, прежде чем сдавать бактериологический анализ мочи.

Взятая порция мочи должна быть транспортирована в короткий период времени. Если проба материала хранится при температуре +18-20 градусов по Цельсию – на протяжении одного-двух часов. Если моча хранится в холодильной камере при температуре +4-8 градусов – в течение пяти-шести часов.

Виды анализа

Среди бактериологического анализа мочи выделяют:

  • БАК посев мочи на флору с установлением чувствительности к основному спектру антибиотиков;
  • БАК посев мочи на флору с установлением чувствительности к широкому спектру антибиотиков;
  • БАК посев мочи на флору с установлением чувствительности к основному спектру антибиотиков и бактериофагам;
  • БАК посев мочи на флору с установлением чувствительности к широкому спектру антибиотиков и бактериофагам.

Все вышеперечисленные виды диагностик позволяют правильно установить тип антибиотика для дальнейшего лечения.

БАК анализ мочи при беременности

Бактериологическая диагностика при беременности входит в основной перечень проводимых исследований. У женщин материал для данного вида исследования могут брать из влагалища, носа и мочи. Из влагалища материал берут для установления заболеваний, которые передаются половым путем. Из носа – для определения золотистого стафилококка. А пробу мочи – для установления бессимптомной или скрытой бактериурии.

БАК анализ мочи при беременности необходимо проводить два раза. Первый – при постановке на учет в женской консультации, а второй – на 36 неделе срока беременности. Но существует вероятность сдачи анализа и большее количество раз, если у беременной женщины присутствуют заболевания почек, мочевого пузыря, а также повышенное количество белка или лейкоцитов при клиническом анализе мочи.

Подготовка

Для сбора материала на исследование беременной женщине необходимо приобрести стерильную емкость, куда следует поместить среднюю порцию утренней мочи. После этого биоматериал относится в медицинскую лабораторию.

Чтобы анализ показал достоверные результаты, следует придерживаться основных рекомендаций при заборе материала. К ним можно отнести:

  • тщательный гигиенический туалет половых органов;
  • сбор средней порции материала (при заборе мочи обязательный ввод тампона во влагалище);
  • нормальный питьевой режим (обильное питье может развести концентрацию мочи и заранее вывести бактерии из организма);
  • доставку биоматериала в лабораторию в течение часа.

Интерпретация бактериологического исследования мочи

КОЕ

В расшифровке результатов часто встречается аббревиатура КОЕ. Как было отмечено выше, КОЕ – это колониеобразующая единица. Если при исследовании ее количество обнаружено в пределах 1000 КОЕ\мл, то это будет свидетельствовать о наличии микробов в образце материала, которые случайно попали из половых органов. В этом случае никакого лечения не требуется.

Когда результат анализа показывает количество колониеобразующих единиц 1000000, значит, в наличии имеется воспалительный процесс, вызванный инфекциями половых органов. При помощи такого вида исследования определяется вид бактерий и чувствительность к препаратам антибиотиков.

Результат анализа может показать промежуточные границы, такие как 1000-10000 КОЕ\мл. Эта оценка ставится под сомнение, и саму диагностику следует провести повторно. Но в любом случае его интерпретацию должен проводить только лечащий врач.

Бактерии в моче

Часто БАК анализ показывает присутствие бактерий в моче, которые попали в нее из толстого кишечника человека. Они перемещаются из области анального отверстия к мочеиспускательным каналам, после чего проникают в мочевой пузырь и далее. Этот путь проникновения бактерий принято называть восходящим. Наиболее часто такой вид попадания микробов встречается у женщин из-за их анатомического строения. Существует также и нисходящий путь, при котором микроорганизмы проникают в мочу во время возникновения инфекции в почках. При такой оценке анализа следует проводить лечебную терапию препаратами антибиотиков.

4.5 4.50 из 5 (5 Голосов)

БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ , ыи- кробиологич. анализ, служит для обнаружения различного рода микроорганизмов и определения их вида в подлежащем обследованию материале (в почве, воде, продуктах разного рода, отделениях животных и т. д.); состоит в изучении биологии микроба (его морфологических, биолог, и иммунологических свойств), а для патогенных микробов также и в определении их способности вызывать у экспериментальных животных специ-фич. пат. процессы. Изучение морфологии микробов производится при помощи микроскопа, для чего материал, подлежащий обследованию, подвергается предварительной обработке с тем, чтобы сделать микробов ясно видимыми среди неорганизованного распада, в к-ром они обычно находятся. Достигается это окрашиванием препаратов из исследуемого материала различными естественными или искусственными красками. Так как мертвые микробы окрашиваются 6»1 лучше, то препараты предварительно подвергаются т. н. фиксированию, т. е. обработке разного рода физич. и хим. агентами, быстро убивающими протоплазму-■ жаром, спиртом и т. д. Иногда материал микроеко-пируется и без предварит, обработки, когда требуется по ходу анализа изучение под микроскопом живых микробов (наблюдение подвижности их, отношения к О и пр.). В таких случаях приготовляется препарат в виде т. н. висячей капли. Наблюдение ведется или обычным способом или при затемненном поле зрения микроскопа. При исследовании на присутствие Protozoa весь анализ ограничивается одним микроскопированием, что считается достаточным, т. к. методы культивирования протозоа очень сложны и в широкую практику еще не вошли. В бактериологии анализ не останавливается на изучении формы микроба. Необычайно широкая изменчивость бактерий при ничтожнейших изменениях окружающей среды, прежде всего отражается на форме их; изучение только одной формы микробов привело бы к грубейшим ошибкам при определении их вида. Поэтому, для суждения о виде микроба необходимо знание, кроме морфологии,-и всех его биол. особенностей, его биохим. и иммунологических свойств, а для патогенных-и результата опыта на животном; только совокупность всех этих данных дает возможность б. или м. точно идентифицировать того или иного микроба, определить вид и тип его. Этому и служит вся бактериологическая техника. Культивирование микробов на искусственных питательных субстратах для изучения их биохим. свойств является главнейшим моментом Б. а. В настоящее время такое культивирование встречает еще ряд затруднений. Многих микробов и теперь еще нельзя получить в искусственных культурах. Препятствием служит ряд условий, заключающихся в необычайном разнообразии микробного мира, в резко выраженной специфичности биохим. функций микробов и вытекающей отсюда их изменчивости. Наше незнание многих из этих условий не дает возможности подобрать такие питательные среды, к-рые всегда были бы пригодны. Тем не менее, именно культивирование доступных нам микробов является основным методом их Б. а. В наст, время Б. а. начинается с получения отдельных микробов, подлежащих изучению, в чистых культурах, т. е. в культурах, состоящих из одного вида микроба, без примеси какого-либо другого. Достигается это тем, что материал, подлежащий изучению, распределяется на поверхности твердых питательных сред. Это распределение имеет целью отделить микробов друг от друга. Через известный период времени, чаще всего через сутки, на тех местах субстрата, на которых оказались микробные клетки, образуются скопления микробов, т. н. колонии разросшегося микроба. Эти колонии у многих микробных видов имеют очень характерную форму, чем и пользуются для первого ориентирования в составе микробной флоры. Отдельные колонии извлекаются и переносятся на подходящие питательные среды для дальнейшего культи- вирования. Предполагается, что каждая колония вырастает из одной клетки; но это бывает не всегда, и последнее время все больше и больше в практику входит способ получения колоний из заведомо одной микробной клетки. Такое отделение микроба производится под контролем глаза в микроскопе с помощью прибора, называемого микроманипулятором. Т.к. материал, подлежащий обследованию, заключает в себе огромное количество разнообразных микробов, выделить же необходимо одного определенного из них, то в таких случаях применяются особые питательные среды. В последних или содержатся хим. вещества, вступающие между собой во взаимодействие под влиянием роста микробов, что обнаруживается каким-либо легко доступным проявлением, напр., изменением цвета, выпадением или растворением осадка (среды Эндо, Дригальского, среды с мелом, с кровью), или эти среды заведомо благоприятствуют росту искомого микроба и подавляют рост микробов сопутствующих, напр., среды обогащения для тифа, дифтерии. Только после такой предварительной обработки получают чистые культуры. В тех случаях, когда искомый микроб находится в исходном материале в очень незначительном количестве и трудно поддается непосредственному культивированию, прибегают к опыту на животных (tbc). Материал впрыскивают животному, и после того, как разовьются характерные для данного микроба пат. изменения, выделяют чистую культуру. Получив чистую культуру, приступают к изучению биохим. особенностей данного микроба. Т. к. состав питательных сред очень сложен, то для изучения биохимии к средам прибавляются различные, химически более простые вещества, изменения которых под влиянием роста микробов легко могут быть обнаружены прибавлением какого-либо индикатора-лакмуса,нейтраль-рота и др. Для этой цели служат различные углеводы, моно-, ди-, полисахариды и многоатомные спирты, а также желатина и кровь (эритроциты). На основании изменения того или иного из этих веществ заключают о биохимич. особенностях данного микроба. Громадное значение при определении вида микроба имеет иммунологический метод, основанный на способности животного организма крайне специфически реагировать на парэнтеральное введение инородных белков образованием и накоплением в крови различных т. н. антител. Сыворотка крови таких животных и служит реактивом. В ней присутствие этих антител легко может быть обнаружено рядом простых реакций. Некоторые из этих реакций получили широкое распространение и являются обязательными при идентификации микробных видов. Эти реакции-агглютинация, преципитация и реакция отклонения комплемента. Для непатогенных микробов Б. а. на этом может быть закончен. Для микробов же патогенных обязателен еще эксперимент на животном, особенно при обнаружении нового вида. Идеалом определения всякого патогенного микроба является получение у подходящего животного патологич. изменений, вызываемых данным микробом в естеств. условиях. Однако, наши знания необходимые для такого опыта условий далеко не полны, почему опыты и бывают часто безуспешными. Затем, пат.-анат. данные, полученные в результате опыта, не всегда могут быть достоверны, т. к. видимое здоровое состояние животного ничего не говорит о перенесенных им инфекциях и друг, заболеваниях; обнаруженные изменения, могут быть результатом уже ранее перенесенных заболеваний. Все эти соображения заставляют очень осторожно относиться к получаемым при эксперименте результатам и никогда не удовлетворяться одним удачным опытом. Все же в тех случаях, где реакция со стороны опытного животного по отношению к данному микробу строго определенна и постоянна (как, напр., отношение морской свинки к дифтерии или tbc, или кролика к оспе и бешенству), там эксперимент на животном является обязательным. Б. а. без такого эксперимента недостаточно убедителен. В нек-рых случаях при удачном опыте необходимо выделить в чистой культуре того микроба, который послужил для эксперимента, и идентифицировать его с исходным. Это необходимо потому, что часто введение в животный организм инородного материала пробуждает дремлющие там патогенные процессы и вызывает генерализацию ограниченного страдания, повышая активность находящихся там микробов. При выделении чистой культуры надо поэтому иметь в виду, что можно выделить не исходного микроба, а микроба, случайно находившегося в организме. Кроме того, кровь многих, видимо здоровых, животных содержит в себе различных микробов, к-рые также могут быть выделены и могут ввести в заблуждение исследователя. Общая схема хода Б. а. может быть представлена в таком виде: 1) изготовление препаратов из подлежащего обследованию материала; фиксация их; 2) микроскопирова-ние а) в неокрашенном виде, б) в окрашенном виде; 3) посев на агаровые пластинки для выделения чистой культуры; если необходимо, то после предварительного посева на избирательные или обогащающие среды; 4) биохим. анализ; 5) реакции иммунитета; 6) эксперимент на животных. Целью Б. а., кроме определения вида бактерии, служит и установление его места в систематике микробов. Однако, систематика микробов еще недостаточно разработана, вернее, существует несколько систематик, очень неполных, построенных на различных основах. Все это затрудняет точность анализа. В 1917 г. американские микробиологи создали специальную комиссию, к-рая и разработала систематику бактерий, базируясь, гл. обр., на их иммуно-биологических особенностях и свойствах, обнаруживаемых в культурах. Эта комиссия проверила характеристики всех известных микробов в указанном выше смысле, и результаты ее работ опубликованы. Все выходящие теперь на англ. яз. работы уже придерживаются номенклатуры, принятой в этом руководстве. Лит.: Златогоров С. И., Учение о микроорганизмах, П., 1914; Т а р а с е в и ч Л. А., Ме- дицинская микробиология, Киев, 1910; Омелян-с к и й В. Л., Основы микробиологии, М.-Л., 1926; К о 1 I e W. u. Wassermann A., Handbuch d. path. Mikroorg., В. I, 2 Ausg., Jena, 1912; К о 1 m e r J., Infection, immunity a. biologic therapy, L., 1924; Bergey H., Manual of determinative bacteriology, L., 1927; P a r k W. a. Williams A., Pathogenic microorganisms, N. Y., 1925; В e s s о n A., Technique microbiologique, P., 1925; Wadsworth A., Standard methods, N. Y., 1927.А. Челышй.

Диагностика инфекционных заболеваний необходима для последующего проведения адекватной этиотропной терапии, направленной на уничтожение возбудителя патологического процесса. Выявление и идентификация патогенных микроорганизмов проводится при помощи различных методик лабораторной диагностики, одним из которых является бактериологическое исследование.

Бактериология как наука получила развитие в XIX веке благодаря внедрению бактериологических методик исследования.

Принцип и суть методики

Основной целью бактериологического исследования является выявление и последующая идентификация патогенного (болезнетворного) микроорганизма в исследуемом материале. Для этого проводится посев на специальные питательные среды (мясо-пептонный бульон, плотная среда агар), на котором при наличии возбудителя в материале через некоторое время вырастают колонии микроорганизмов. Их идентифицируют по микроскопическим (размер клеток, их форма, определенный цвет при окрашивании по Граму), биохимическим (способность расщеплять некоторые углеводы или
белки) и антигенным (взаимодействие с антителами к основным классам возбудителя) свойствам. В целом на проведение данной методики диагностики требуется от 48 до 72 часов, что достаточно долго (особенно при необходимости быстрого начала этиотропной терапии инфекционной патологии). Тем не менее данный вид лабораторной диагностики не теряет своей актуальности на сегодняшний день, так как является достоверным для большого количества инфекционных заболеваний.

Очень часто во время бактериологического исследования дополнительно проводится определение чувствительности выделенного патогенного микроорганизма к основным группам современных антибиотиков. Это дает возможность в последующем подобрать наиболее эффективную этиотропную терапию.

Когда проводится бактериологическая диагностика

Показанием к проведению бактериального исследования служит диагностика различных инфекционных заболеваний, к которым относятся:


Также данная методика может проводится для определения возбудителя гнойных процессов различной локализации. В первую очередь это необходимо для определения чувствительности выявленных микроорганизмов к антибиотикам, так как при развитии гнойного процесса возбудители часто являются устойчивыми к большинству антибиотиков.

Диагностика дисбактериоза при помощи бактериологического исследования дает возможность определить вид условно-патогенных микроорганизмов, а также их количество, на основании чего делается заключение о выраженности нарушения нормальной микрофлоры.

Материалом при бактериологическом исследовании служит моча, кровь, мазки из полости носа, уретры, влагалища, прямой кишки, кал, сперма у мужчин, мокрота. Выбор материала зависит от показаний к проведению данного метода лабораторной диагностики и локализации патологического процесса.

Расшифровка результатов

В большинстве случаев результат исследования основывается на 2-х показателях - факт наличия выявляемого
микроорганизма (положительный или отрицательный результат), а также количество бактериальных клеток на единицу объема исследуемого материала (данный показатель имеет место только при положительном результате). Численность бактерий выражается в количестве колониеобразующих единиц (КОЕ). Чем выше данный показатель, тем большее количество бактерий в исследуемом материале. Также результат может включать показатели чувствительности выявленного микроорганизма к антибиотикам. Он обычно состоит из списка основных классов антибактериальных средств (

Бактериологический посев осуществляется для изучения биологических и физико-химических свойств бактерий, которые используются для диагностики инфекционных заболеваний на основе микробов одного вида. Современные технологии позволяют получить необходимые бактерии с помощью и , которые, однако, могут показать ложные результаты, не определив возбудителя инфекции.

В зависимости от среды обитания микроорганизмы и бактерии имеют возможность размножаться. Для обеспечения интенсивно размножения бактериям необходимы температурный режим и пищевые добавки.

Условия для размножения микроорганизмов

Бактерии способны к размножению только в определенной рН среде, которая обеспечивает необходимые параметры влажности, кислотности, восстановительных параметров, вязкости и осмотических свойств . Определенный набор бактерий питаются и существуют в определенной среде, которая может быть простой, сложной, мягкой, твердой, универсальной или индивидуальной . Универсальная среда обеспечивает необходимыми условиями многие виды микроорганизмов, в то время как индивидуальная среда обеспечивает жизнедеятельность определенного вида бактерий.

Виды бактерий

Бактерии и микроорганизмы, живущие на коже и слизистых оболочках человеческого организма, являются интересной сферой изучения и диагностики болезней и используются во многих отраслях медицины. Бактерии и микроорганизмы, живущие в слизистых оболочках и на коже человека, распределяются по представителю:

  1. Постоянный обитатель организма, не несущий угрозы для здоровья и не способствующий развитию заболеваний. Однако исчезновение этих бактерий приводит к появлению и развитию заболеваний. Примерами заболеваний может послужить дисбактериоз в кишечнике или бактериальный вагиноз. Данные заболевания вызваны нарушениями нормальной микрофлоры и исчезновением необходимых бактерий;
  2. Условно-патогенная микрофлора – является причиной развития болезней при высоком показателе условных патогенных микробов, размножающихся при иммунодефиците;
  3. Патогенные микробы, отсутствующие в здоровом человеческом организме . Попадая в среду размножения, провоцируют заболевания и дают начало инфекционным процессам. являются возбудителями наиболее опасных заболеваний, например, чумы, оспы, холеры и венерических заболеваний.

Назначение бактериологических посевов

Для выявления инфекционных процессов, вызванных микробами и микроорганизмами, проводятся бактериологические посевы, способные определить вид микроорганизма и предотвратить размножение бактерий. В зависимости от среды обитания бактерий, методы посевов также имеют отличия, позволяющие получить чистую культуру микроорганизмов, не содержащую бактерии другого вида.

Обследуя пациента, которого тревожат те или иные проблемы со здоровьем, доктор назначает бактериологический посев, который может подтвердить предположение доктора о проникновении патогенного возбудителя, нарушение нормальной микрофлоры или чрезмерное размножение . Результаты анализа показывают:

  • вид возбудителя и его название на латинском языке;
  • концентрацию и количество бактерий;
  • патогенность микроорганизма.

При исследовании некоторых биологических материалов основной единицей измерения является КОЕ\мл , которая сообщает о количестве колониеобразующих единиц бактерий на миллилитр биологического материала. При анализе на патогенные микробы результаты исследования могут оказаться положительными или отрицательными. Получая анализы исследования, сообщающие о наличии или превышающие показатель колониеобразующих единиц, назначается повторный анализ, подтверждение которого информирует об инфекционном процессе в организме и требует лечения.

При исследованиях патогенного микроорганизма, выявленного во флоре, проводятся дополнительные анализы – посев микрофлоры , показывающие чувствительность организма к антибиотикам, которые могут устранить . Действующие препараты, к которым микробы проявляют чувствительность, обозначаются буквой S, антибиотики неспособные устранить заболевание – R.

Данное исследование помогает точно определить вид антибиотика, способного бороться с патогенным заболеванием без нанесения вреда организму.

Подготовка к бактериологическому посеву

Исследованию может подлежать любой биологический материал. Основным материалом для анализа служат:

Бактериологический посев требует подготовки и соблюдения определенных правил. Анализ крови совершается врачами и не требует серьезной подготовки, а назначенный урологом или гинекологом анализ мочи или мазок слизистой половых органов, требует выполнения правил перед анализом. Анализ мочи у женщин может захватить непатогенные кокки, но при этом моча остается стерильной, мужской анализ мочи может захватить непатогенные бактерии, стафилококки, дифтероиды. Чтобы увеличить качество исследуемого биологического материла, и избежать повторного анализа, необходимо обеспечить максимальную стерильность.

  1. Перед анализом необходимо уделить время гигиене половых органов;
  2. Женщинам, которым необходимо сдать мочу на анализ, следует закрыть вход во влагалище ватным тампоном;
  3. Анализ проводится на средней порции мочи, составляющей примерно 10 мл;
  4. Время обработки мочи, взятой на посев, - не более 2 часов.

При посеве из прямой кишки, уретры, влагалища, шейки матки процедура проходит в медицинских учреждениях, однако требует выполнения одного правила перед анализом: накануне посева запрещено спринцевание, подмывание и использование любых антисептических средств .

Время исследования и анализа биологического материала зависит от самого материала, таким образом, период ожидания результата может занять от 3 до 14 дней . Стоимость анализа также зависит от вида посева, но в некоторых случаях в поликлинике по назначению врача и в женской консультации посев осуществляется бесплатно. Для беременных женщин бактериологический посев является обязательной процедурой и должен проводиться дважды, второй раз включает посев слизистой оболочки носа и рта.

Интересные факты о бактериологическом посеве

Патогенные гонококки, которые можно выявить путем бактериологического посева, осваиваются в организме на третий день, провоцируя гонорею, постепенно захватывающую весь организм. Для выявления болезни проводятся посев, культивирование, микроскопия и другие анализы.

Иногда в мазке половых путей при анализе выявляются диплококки - парные «кофейные зерна». Данная находка не указывает на венерическое заболевание, оно появляется в постменопаузе.

Посев мочи назначается только в необходимом случае, так как требует серьезной и трудной работы, поэтому врачи часто избегают анализа мочи.

Большое количество анализов требует , которую довольно тяжело диагностировать. Инфекцию определяют с помощью посева, затем культивируют, изучая чувствительность к антибиотикам и различным терапиям.

Беременность предоставляет уникальные возможности для маскировки микроорганизмов. Поэтому бактериологические посевы являются обязательной программой для беременных женщин.

Все бактериологические посевы и анализы – это безболезненные процедуры, которые, однако, помогают выявить болезнь и найти средство для ее устранения.

Методы проведения бактериологического посева

Для выявления микроорганизмов используются приспособления, позволяющие перенести материал на среду в стерильных условиях. Процедура осуществляется бактериальной петлей , пастеровской пипеткой или стеклянной палочкой . Приспособления, известные медицинским работникам с XIX века, прошли через изменения и усовершенствования, появились улучшенные стерильные способы использования инструментов благодаря одноразовым пластиковым приспособлениям.

Процедура проводится в стерильных условиях рабочей зоны, обработанной дезинфицирующими средствами. Медработники используют стерильные перчатки, которые, как одежда и рабочая зона, должны быть обработанными средствами, не мешающими выделению изолированных штаммов. Время посева должно быть минимальным, но процедура требует внимательность и аккуратности.

Выделение штаммов и исследование чистых культур

Из-за особенностей некоторых микроорганизмов, которые требуют индивидуального подхода и изучения, выделение штаммов проходит различными способами, подходящими под исследование бактерий определённых видов. Таким образом, мазок может помещаться в определённую среду, которую через некоторое время следует сменить другой средой. В некоторых случаях жидкость следует центрифугировать, а затем изучить осадок с помощью посева.

Бактериологический посев позволяет определить размер, форму, тип бактерии, наличие жгутиков, спор или капсул на теле микроорганизма, а также определить свойства бактерий к окрашиванию. Данные исследования информируют медицинского работника, делающего анализ, о наличии заболеваний, патогенных бактерий, и возможностях выделения отдельной клетки, что делает анализ посева важным этапом научных целях для изучения генетических исследований.

Известно, что микроорганизмы, невзирая на свой «малый рост», тоже имеют пищевые «пристрастия», температурный оптимум, в общем, среду, которая им идеально подходит, где они чувствуют себя комфортно и хорошо, а поэтому начинают интенсивно размножаться и расти.

Бактериологический посев или, как принято называть короче – бак посев, применяется для получения большого количества микробов одного вида (чистая культура) с целью изучения их физико-химических и биологических свойств, чтобы затем полученные данные использовать для диагностики инфекционных заболеваний.

К сожалению, даже популярные нынче , и другие методы, основным недостатком которых являются ложноположительные или ложноотрицательные результаты, не всегда могут идентифицировать возбудителя. Кроме того, они не способны подобрать антибактериальные препараты направленного действия. Подобную задачу решает бак посев, который часто не спешат назначать, ссылаясь на то, что, например, медленно культивируется, а стоимость анализа немалая. Однако ведь и здоровье того стоит!

Для питания и дыхания нужны условия

Микробиологи нынче знают, что каждому возбудителю нужна своя «родная» среда с учетом ее рН, окислительно-восстановительных потенциалов, вязкости, влажности и осмотических свойств. Среды могут быть мягкими и твердыми, простыми и сложными, универсальными и не очень, однако во всех случаях они должны обеспечивать питание, дыхание, размножение и рост бактериальной клетки.

пример роста микроорганизмов после бак-посева в питательную среду

Некоторые среды (тиогликолевая, Сабуро) подходят для широкого круга микроорганизмов и называются универсальными. Другие же предназначены только для определенных видов, например, пневмококк и золотистый стафилококк, продуцирующие гемолизины, растут на кровяном агаре, который служит для выделения особо «капризных» и, вместе с тем, опасных штаммов. Таким образом, разновидностей сред множество, где каждая из них выращивает свой круг микроорганизмов.

Цель культивирования микроорганизмов и значимость ее для диагностики

Кроме воды, воздуха, почвы, содержащие в тех или иных концентрациях различные микроорганизмы, в том числе и приносящие болезнь (патогенные), многие отрасли медицинской науки интересуют микробы, живущие на коже и слизистых человеческого организма, которые могут быть представлены:

  • Постоянными обитателями, не несущими никакой опасности человеку, то есть, нормальной микрофлорой организма, без которой мы просто жить не можем. Например, исчезновение бактерий, живущих в кишечнике и участвующих в процессе пищеварения, приводит к дисбактериозу, лечить который – дело непростое. Так же происходит и с исчезновением вагинальной микрофлоры. Ее тут же заселяют условно-патогенные микроорганизмы, гарднереллы, например, которые вызывают ;
  • Условно-патогенной флорой, которая приносит вред лишь в больших количествах при определенных условиях (иммунодефицит). Вышеназванная гарднерелла – представитель такого типа микроорганизмов;
  • Наличием патогенных микробов , которые в здоровом теле не присутствуют. Они чужды человеческому организму, куда попадают случайно при контакте с другим (больным) человеком и вызывают развитие инфекционного процесса, порой, довольно тяжелого или даже смертельного. Например, встреча с возбудителями – еще куда ни шло, на первых порах лечится, а вот (упаси Бог!) выпустит на волю холеру, чуму, черную оспу и др.

К счастью, многие из них побеждены и в настоящее время находятся «за семью печатями» в специальных лабораториях, однако человечество в любой момент должно быть готово к нашествию невидимого врага, способного уничтожить целые народы. Бактериологический посев в подобных случаях играет, пожалуй, главную роль в идентификации микроорганизма, то есть, определении рода, вида, типа и т.д. (токсономическое положение), что очень важно для диагностики инфекционных процессов, в том числе и заболеваний, передающихся половым путем.

Таким образом, методы посева, как и питательные среды, бывают разными, тем не менее, цель у них одна: получить чистую культуру без посторонних примесей в виде микробов других классов , которые обитают повсеместно: в воде, в воздухе, на поверхностях, на человеке и внутри его.

Когда назначается бак посев и как разобраться в ответах?

Название микроорганизма и его количество

Бактериологический анализ пациенты сами себе не назначают, это делает врач, если у него есть подозрения, что проблемы больного, предъявляющего различные жалобы, связаны с проникновением в организм патогенного возбудителя или с усиленным размножением микроорганизмов, постоянно живущих с человеком, но проявляющих патогенные свойства только в определенных условиях. Сдав анализ и через некоторое время получив на руки ответ, человек теряется, а порой и пугается, увидев непонятные слова и обозначения, поэтому, чтобы этого не произошло, хочется дать краткое разъяснение по данному вопросу:

При исследовании биологического материала на присутствие патогенных микроорганизмов ответ может быть отрицательным или положительным («плохой бак посев»), поскольку организм человека является для них лишь временным пристанищем, а не естественной средой обитания.

Иной раз, в зависимости от того, какой материал подлежит посеву, можно увидеть количество микроорганизмов, выраженное в колониеобразующих единицах на мл (одна живая клетка даст рост целой колонии) – КОЕ/мл. Например, посев мочи для бактериологического исследования при норме дает до 10 3 КОЕ/мл всех выявленных бактериальных клеток, в сомнительных случаях (анализ повторить!) – 10 3 – 10 4 КОЕ/мл, при воспалительном процессе инфекционного происхождения – 10 5 и выше КОЕ/мл. О двух последних вариантах в разговорной речи, порой, выражаются просто: «Плохой бак посев».

Как «найти управу» на патогенный микроорганизм?

Одновременно с посевом материала в таких ситуациях производится посев микрофлоры на чувствительность к антибиотикам, который даст четкий ответ врачу – какие антибактериальные препараты и в каких дозах «испугают» «незваного гостя». Здесь тоже есть своя расшифровка, например:

  • Вид микроорганизма, допустим, та же Е.coli в количестве 1х10^ 6 ;
  • Название антибиотика с обозначением (S) указывает на чувствительность возбудителя к этому препарату;
  • Вид антибиотиков, не действующих на микроорганизм, обозначается символом (R).

Бактериологический анализ представляет особую ценность в определении чувствительности к антибиотикам, поскольку основной проблемой в борьбе с хламидией, микоплазмой, уреаплазмой и др. остается подбор действенного лечения, не приносящего вред организму и не ударяющего по карману пациента.

Таблица: альтернативный пример результатов бак-посева с выявлением эффективных антибиотиков

Правильная подготовка к бактериологическому анализу – залог достоверного результата

Бактериологическому анализу может подвергаться любой биологический материал, взятый у человека (кожа, кровь, сперма, слизистые ротовой полости, дыхательных и мочеполовых путей, желудочно-кишечного тракта, органов зрения, слуха и обоняния и др.). Чаще всего бак посев назначают гинекологи и урологи, поэтому на нем следует несколько остановиться.

Правильная подготовка к бактериологическому посеву будет залогом правильного результата, потому что в противном случае, анализ придется сдавать заново и ждать назначенное время. Как сдать кровь на стерильность из вены – это задача медработников. От больного здесь, как правило, ничего не зависит, он просто предоставляет локтевой сгиб, а медсестра производит забор в стерильную пробирку с соблюдением всех правил асептики и антисептики.

Другое дело – моча или из половых путей. Здесь пациент должен обеспечить первый этап (забор), соблюдая предписанные правила. Следует заметить, что моча женщин и мужчин несколько отличается, хотя в мочевом пузыре у обоих полов она стерильна:

  • У женщин при прохождении через мочеиспускательный канал может захватить небольшое количество непатогенных кокков, хотя в целом, часто остается стерильной;
  • У мужчин все несколько по-другому. Передняя часть уретры может снабдить проходящую мочу находящимися там:
    1. дифтероидами;
    2. стафилококками;
    3. некоторыми непатогенными грамотрицательными бактериями, что и покажет впоследствии бактериологический анализ.

Однако, если они находятся в допустимой концентрации (до 10 3 КОЕ/мл), то пугаться нечего, это вариант нормы.

Чтобы избежать присутствия других микроорганизмов и максимально обеспечить стерильность взятого материала , перед сдачей анализа производится тщательный туалет половых органов (вход во влагалище у женщин закрывается ватным тампоном – защита от попадания отделяемого половых органов). Для анализа берется средняя порция мочи (начало мочеиспускания в унитаз, приблизительно 10 мл средней порции в стерильную баночку , окончание в унитаз). Пациентам необходимо знать: моча, взятая на посев, должна быть обработана не позднее, чем через два часа при хранении не выше 20°С, поэтому следует рассчитывать время на транспортировку.

Кроме этого материал на бак посев при необходимости берут из уретры и прямой кишки у мужчин, из уретры, прямой кишки, влагалища, шейки матки и цервикального канала – у женщин, но это происходит в медицинском учреждении, куда пациент должен прибыть. Подмывание, спринцевание и использование антисептических средств в таких случаях запрещено.

Другие вопросы, волнующие пациентов

Многие пациенты интересуются, сколько дней делается анализ. Однозначно на этот вопрос ответить нельзя, все зависит от того, какой материал подвергается исследованию и какой возбудитель нужно искать. Иногда ответ готов через 3 дня, иногда через неделю или даже дней 10 – 14 , поскольку некоторые образцы требуют пересева на другую среду.

Не обходят стороной люди, направляющиеся на бак посев и вопрос о цене анализа. Примерная стоимость в Москве составляет порядка 800 – 1500 рублей. Разумеется, она может быть выше и зависит от широты спектра бактериологического поиска. Бесплатно анализ, наверное, можно сдать при беременности в женской консультации, или в поликлинике по особым медицинским показаниям.

Для беременных бак посев является обязательным, сдается 2 раза (при постановке на учет и в 36 недель), при этом, мазок берется не только из половых путей, но и со слизистых носа и зева. Объектом поиска в данном случае, кроме урогенитальных инфекций, будет золотистый стафилококк (Staphylococcus aureus), который в послеродовом периоде может натворить много бед (гнойный мастит и др). Кроме этого, беременным в обязательном порядке делается посев мочи, соскоба влагалищного эпителия и мазки из шейки матки и цервикального канала.

Многие женщины, перед тем как отправиться на процедуру очень боятся таких страшных слов и начинают раздумывать: «А нужно ли это? Может, не пойти». Спешим заверить, что анализы абсолютно безболезненны. Мазок из шейки матки и цервикального канала берется стерильной цитощеткой, не причиняя женщине абсолютно никакой боли, зато впоследствии бак посев из ш/м и ц/к защитит и будущую мать, и плод от возможных осложнений. Объектом поиска при беременности являются возбудители хламидиоза, уреа- и микоплазмы, дрожжеподобный (обычно это Candida albicans), и другие условно-патогенные и патогенные микроорганизмы.

Видео: ролик-демонстрация по бак-посеву из цервикального канала

Частные случаи, особо интересные сдающим анализы

Попав в половые пути патогенные микроорганизмы, через самое короткое время осваиваются и начинают свою вредную деятельность. Например, всегда патогенные гонококки (Neisseria), являющиеся виновниками довольно неприятной болезни, называемой и относящейся к ЗППП, чувствуют себя «как дома» буквально на 3 день. Они начинают активно размножаться и смело двигаться по половым путям вверх, захватывая все новые территории. Всем известно, что гонорея нынче неплохо лечится и ее уже почти никто не боится. Но для начала ее нужно найти. Основным методом поиска этой инфекции считается бак посев, культивирование, идентификация с помощью окрашивания по Граму, микроскопия.

Найденные в мазке, взятом «на флору» из половых путей, попарно лежащие «кофейные зерна» (диплококки), не указывают на наличие венерического заболевания. Такая микрофлора влагалища часто появляется в постменопаузе и ни о чем плохом не говорит. Отобранный в нестерильных условиях на предметное стекло и окрашенный метиленовым синим или по Романовскому (цитология) мазок, не может дифференцировать микроорганизм. Он может только предположить и направить пациентку на дополнительное исследование (получение изолированной культуры).

Следует заметить, что, если соскоб со слизистых мочеполовых путей, взятый для посева на уреаплазму, является не таким уж редким явлением, то посева мочи сами врачи часто избегают, поскольку с ней работать сложнее.

Трудности в диагностике создает , приносящая большой вред не только при беременности . Кроме этого, хламидия вызывает множество заболеваний, свойственных не только женщинам, но и мужскому населению тоже, поэтому ее сеют, культивируют, изучают, определяют чувствительность к антибактериальной терапии и, таким образом, борются с ней.

При беременности вообще без бактериологического посева трудно обойтись, поскольку многие микроорганизмы, маскируясь в цитологическом мазке, могут быть пропущены. Между тем, влияние некоторых возбудителей ЗППП на плод бывает губительным. К тому же лечить беременную женщину значительно сложнее, а назначать антибиотики «на глаз» просто недопустимо.

Методы посева

Для выделения чистых культур возбудителей на первом этапе прибегают к их посеву на соответствующие среды, который проводится в специальных (стерильных!) условиях. В основном, перенос материала на среду осуществляется с помощью приспособлений, применяемых еще в 19 века великим Луи Пастером:

  • Бактериальной петлей;
  • Пастеровской пипеткой;
  • Стеклянной палочкой.

Конечно, многие инструменты за 2 столетия претерпели изменения, на смену пришли пластиковые стерильные и одноразовые, однако и старые не остались в прошлом, продолжая и поныне служить микробиологической науке.

Первый этап получения колоний требует соблюдения определенных правил:

  1. Посев осуществляется над спиртовкой в боксе, предварительно обработанном дезинфектантами и кварцеванием, или в ламинарном шкафу, обеспечивающем стерильность в рабочей зоне;
  2. Одежда медработника, перчатки и среда также должны быть стерильными, поскольку обратное мешает выделению изолированных штаммов;
  3. Работать в боксе нужно быстро, но аккуратно, нельзя разговаривать и отвлекаться, при этом – необходимо помнить о личной безопасности, ведь материал может быть заразным.

Выделение штаммов и изучение чистых культур

Выделение штаммов не всегда одинаково, поскольку некоторые биологические среды, находящиеся в человеческом организме требуют индивидуального подхода, например, гемокультуру (кровь) сначала в жидкой среде (соотношение 1: 10) немного «подращивают», поскольку кровь (неразведенная) может убить микроорганизмы, а затем, через сутки или больше, пересевают на чашки Петри.

Посев мочи, промывных желудочных вод и других жидких материалов тоже имеет свои особенности, где для получения чистой культуры, жидкость сначала следует центрифугировать (условия – асептические!), а уж затем сеять, причем не саму жидкость, а ее осадок.

Культивирование и выращивание колоний осуществляют на чашках Петри или помещают сначала в жидкую среду, разлитую в стерильные флакончики, а затем изолированные колонии еще раз высевают, но уже на скошенный агар и помещают материал на сутки в термостат. Убедившись в чистоте полученной культуры, штаммы переносят на предметное стекло, делают мазок и окрашивают по Граму (чаще всего), Цилю-Нильсену и др. и для дифференцировки изучают морфологию микроба под микроскопом:

  • Размер и форму бактериальной клетки;
  • Наличие капсул, жгутиков, спор;
  • Тинкториальные свойства (отношение микроорганизма к окрашиванию)*.

*Читатель, вероятно, слышал о таком возбудителе, как бледная трепонема? Это – возбудитель сифилиса, а ее название (бледная) поэтому и появилось, что она плохо воспринимает краски и остается слегка розоватой при окрашивании по Романовскому. Микроорганизмы, невоспринимающие анилиновые красители называются грамотрицательными, а воспринимающие – грамположительные. Грамотрицательным бактериям придают розовый или красный цвет при окраске по Граму дополнительные красители (фуксин, сафранин).

Бак посев можно назвать древним анализом, однако его популярность от этого отнюдь не падает, хотя современная бактериология имеет возможности выделения не только штаммов, но и отдельной клетки из него, которая называется клоном . Однако для получения клона необходим специальный прибор – микроманипулятор, который в обычных лабораториях отсутствует, поскольку применяется, в основном, в научно-исследовательских целях (генетические исследования).